Cтраница 3
Как указывалось выше, в работе с растительными пигментами следует соблюдать большие предосторожности, чтобы избежать разложения во время разделения. По Цшейле, при получении чистого хлорофилла следует избегать высыхания. Особенно опасно оставлять хлорофилл в соприкосновении с другими составными веществами клеток после того, как листья убиты, так как убивание разрушает барьеры проницаемости, денатурирует белки и лишает пигменты защиты, которой они пользуются в живых клетках. Стрейн и Мэннинг [21] отмечают, что после того, как свежий растительный материал простоит в разведенном спирте только один день, на хроматограмме можно наблюдать не менее 15 различных зеленых полос. Эти полосы указывают на присутствие такого же числа продуктов превращения двух начальных зеленых пигментов. [31]
Несмотря на это предположение, все-таки пока лиофильная сушка материала считается наиболее щадящим приемом фиксации. К числу других, значительно менее надежных, способов консервации может быть отнесена фиксация паром с последующей сушкой в сушильном шкафу. Опасность такого рода фиксации состоит в частичном извлечении водорастворимых фитогормонов и ингибиторов, а также в разрушении лабильных комплексов из-за относительно медленного процесса инактивации ферментов. Опасаясь артефактов, возникающих при сушке, некоторые исследователи предпочитают работать со свежим растительным материалом. При этом в качестве фиксатора часто используется серный эфир. Такого рода экстракция обычно ведет к побурению тканей, даже если извлечение ростовых веществ проводят на холоду ( J. [32]
Определение состава растительного материала начинается с отбора образца и подготовки его к анализу. Неправильный отбор образца делает бессмысленной дальнейшую работу. Если образец взят случайно, то, как бы тщательно ни были выполнены все операции по химическому определению содержания азота и зольных элементов, представление о его химическом составе будет неправильным. Поэтому взятию средней пробы, отбору аналитической пробы, подготовке образцов к анализу необходимо уделять большое внимание. Как уже было указано, вес средней пробы свежего растительного материала составляет 200 - 500 г, а во многих случаях достигает 1 - 2 кг. [33]
Указанными авторами был разработан применительно к растительным объектам хромато-графический метод определения суммы дикарбоновых аминокислот. Этот метод заключается в пропускании водного экстракта из фиксированного кипящим этиловым спиртом растительного материала через колонку окиси алюминия, обработанную слабой соляной кислотой, с последующим вытеснением адсорбированных дикарбоновых аминокислот раствором щелочи. Общий ход процедур следующий. Определенное количество свежего растительного материала фиксируют кипящим 96 % - ным этиловым спиртом в течение 5 мин. [34]