Cтраница 3
Для этих условий, как отмечается в литературе, практически безразлично, применяют ли предварительно оттененную реплику, или же оттеняют уже снятую с объекта реплику. Несомненно, реплики с успехом могут применяться и применяются для изучения более мелких деталей, но здесь положение становится менее определенным. Авторы при помощи предварительно оттененных углеродных реплик изучали расположение макромолекул в кристаллах различных вирусов и для наиболее низкомолекулярных соединений обнаружили частицы со средним размером 30 - 40 А. Они пришли к заключению, что лимитирующим фактором здесь является не точность самого метода реплик, а чистота препаратов ( белковые и другие загрязнения биологических препаратов нередко настолько прочно удерживаются на поверхности, что они как бы входят в состав самого объекта), а также возможные деформации реплик под действием электронной бомбардировки при больших увеличениях. [31]
Преимущества метода реплик состоят в том, что его можно применять ко всем высокомолекулярным соединениям, в том числе нерастворимым, и определение молекулярного веса производить также и на технических смесях, так как присутствие других ингредиентов обычно не мешает измерению. Реплики получают с поверхности излома замороженного полимера. Естественно считать, что межмолекулярные силы слабее, чем внутримолекулярные, представляющие собой силы химической связи. Поэтому образования, наблюдаемые на микрофотографиях реплик с поверхности излома полимеров, могут быть интерпретированы как одиночные макромолекулы или их агрегаты. Однако иногда бывает нелегко отличить молекулу от агрегата или от структурных неоднородностей материала, применяемого в качестве промежуточного отпечатка, что является недостатком метода реплик. Проще обстоит дело с исследованием биологических макромолекул, значительную часть которых составляют белки с очень большим молекулярным весом, часто равным нескольким миллионам. Помимо большой величины этих молекул, исследование облегчается также тем, что их можно получить в кристаллическом состоянии и периодичность структуры поверхности кристалла позволяет проводить более точную идентификацию. [32]
На неоттененных пластических репликах из-за слабого контраста разрешение лучше 100 - 200 А получить не удается. После оттенения контраст и разрешение существенно улучшаются, так что, по-видимому, можно получить разрешение не хуже 50 А. Подробнее вопрос о разрешении реплик обсуждается далее на стр. Здесь лишь отметим, что грубая глобулярная структура полученных на поверхности воды коллодиевых пленок, выявляемая при их оттенении, отнюдь не определяет разрешения реплик. Эта вторичная структура, характеризующаяся наличием глобул с размерами порядка 100 А, появляется лишь в том случае, если пленка формируется без контакта с твердой поверхностью. В последнем случае, что характерно для метода реплик, молекулы, по-видимому, вследствие адсорбции плотно упаковываются на поверхности и глобул не образуется. [33]