Амплификация

Cтраница 1

Значение амплификации рДНК состоит, вероятно, в том, что создаются условия для образования большого количества рибосом, необходимых для ускорения белкового синтеза. [1]

Селекции рибозийа с РНК-лигазной активностью. [2]

ДНК-копия непрореагировавшего акцепторного олигонуклеотида амплификации не подвергается. Таким способом проводится вторая селекция. Для продолжения процесса нужно провести транскрипцию той части амплпфнката, который соответствует донорной РНК. После этой повторной амплификации проводится транскрипция и восстанавливается донорный фрагмент, но уже прошедший цикл селекции, т.е. теоретически содержащий только каталитически активный материал, а практически существенно обогащенный по каталитически активным последовательностям. Это дает возможность провести еще один или несколько циклов селекции. [3]

Химический синтез олигонуклеотидных праймеров, содержащих в определенных сайтах разные нуклеотиды. В данном случае в сосуде с G-фосфо-рамидитом ( 94 % содержатся также фосфорамидиты А ( 2 %, С ( 2 % и Т ( 2 %, так что в результате реакции образуется смесь олигонуклеотидов, в которых в тех сайтах, где должен находиться G, присутствуют А, С или Т. [4]

Пара праймеров, которая используется для амплификации левого фрагмента, включает неполностью комплементарный олигонуклеотид, спаривающийся с тяжелой цепью гена-мишени, и обычный, полностью комплементарный праймер, гибридизую-щийся с участком легкой цепи, фланкирующим левый уникальный сайт рестрикции. Один из праймеров, использующихся для амплификации правого фрагмента, содержит некомплементарные нуклеотиды и спаривается с тяжелой цепью гена-мишени, а второй праймер полностью комплементарен участку легкой цепи, фланкирующему второй ( правый) уникальный сайт рестрикции. Продукты ПЦР-амплификации очищают и объединяют, а затем подвергают денатурации и ренату-рации. В результате образуется некоторое количество частично двухцепочечных молекул ДНК, спаренных в области гена-мишени. [5]

Электрофорез ПЦР-амшшфи-цированных фрагментов растительной ДНК в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием бромистым эти-дием. Для амплификации фрагментов каждой из двух культур использовали три разных произвольных праймера. В случае праймеров А и В характер распределения полос в полиакриламидном геле для культур 1 и 2 совпадает, если же используется праймер Б, то положение полос различается. Таким образом, с помощью праймера Б можно выявлять различия между культурами 1 и 2. [6]

Число разных фрагментов ДНК, образующихся при амплификации, зависит от праймера и геномной ДНК. [7]

Суть ПЦР состоит в циклическом удвоении ( амплификации) определенного участка ДНК с помощью специфических прайме-ров ( затравок) особых ферментов-полимераз. После первого цикла из одного фрагмента ДНК образуется два, после второго - четыре и далее увеличение количества ДНК идет в геометрической прогрессии. В конечном итоге, даже если в образце присутствовала всего одна молекула НК, образуется достаточное количество ДНК, чтобы ее можно было легко выявить обычными физико-химическими методами - хроматографией или электрофорезом. [8]

Механизм эволюции основан на трех повторяющихся процессах: отборе, амплификации ( процесс производства потомков) и мутации. Он используется в качестве механизма случайно направленного комбинаторного перебора при решении задач оптимизации и слабоструктурированных проблем принятия решений. [9]

Для выявления ДНК легионелл разработано несколько вариантов ПЦР, основанных на амплификации гена mip ( кодирует поверхностный макрофаг-индуцирующий белок), гена цитолизина и ряда других маркеров. Наиболее широко применяется двух-этапная ПЦР-диагностика: вначале - предварительное определение легионелл с универсальными для семейства праймерами ( чувствительность - 30 - 50 клеток в образце), а затем проводят внутривидовую идентификацию L. Использование ПЦР позволяет также обнаруживать легионеллы в объектах внешней среды и изучать их связи в различных микробиоценозах. [10]

Схема селекции для получения РНК со сродством к небольшим лигандам. [11]

В простейшем случае, чтобы в дальнейшем без всяких специальных ухищрений проводить амплификацию, желательно, чтобы рандомизованные последовательности находились между двумя участками с определенной последовательностью, которые после селекции могли бы быть использованы для прай-меров. [12]

Дарвина, эволюция осуществляется во взаимодействии трех повторяющихся вновь процессов: отбора, амплификации, мутации. Критерий отбора подобен библейскому: плодитесь и размножайтесь. Стратегия повторяющейся рандомизации может заставить молекулы эволюционизи-ровать в направлении улучшения функциональных характеристик. [13]

Кроме того, для проведения обычной ПЦР необходимо знать нуклеотидную последовательность искомого гена или его фрагмента - мишени для амплификации. [14]

Прежде чем приступить к описанию экспериментов и полученных результатов по созданию штамма-продуцента термостабильной ДНК полимеразы считаем необходимым кратко охарактеризовать сам процесс ДНК амплификации и роль в нем термостабильной ДНК полимеразы. [15]

Страницы: 1 2 3 4