Cтраница 4
Комбинированное использование тонкослойной гель-фильтрации с электрофорезом или иммунодиффузией до настоящего времени представляет собой один из наиболее тонких методов микроанализа белков. Хансон и др. [10] разработали метод двумерного разделения, используемый для анализа белков. На первом этапе белки подвергают гель-фильтрации в тонком слое сефадекса G-200 или G-100, - а на втором - электрофорезу. Они предложили прибор, в котором хроматографическую пластинку можно закреплять под углом для гель-фильтрации и горизонтально для электрофореза. [46]
В работе [1] явление частотной зависимости диэлектрической проницаемости было использовано для полидисперсного анализа белков. [47]
Органическая фракция пыли, собранной на фильтрах, отделяется обычно с помощью экстракции растворителями. Восьмичасовая экстракция ацетоном удаляет большинство небелковых органических соединений, что используется при анализе белков. Однако при обычных способах химического отделения органической фракции чаще используется экстракция бензолом. Для разделения и идентификации полициклических углеводородов по методу хроматографической адсорбции в качестве элюирующего вещества чаще всего применяется очищенный циклогексан. [48]
В первой стадии исследования пептид должен быть полностью гидролизован, а природа образующихся при этом аминокислот должна быть определена при помощи хроматографии на бумаге. Однако во всех других случаях следует пользотаться наиболее точными методами, применяемыми в анализе белков. [49]
Метод ВЭЖХ благодаря своей высокой разрешающей способности и скорости сейчас применяется для выделения и анализа белков. Этим методом также успешно выполняется анализ аминокислот при определении аминокислотных последовательностей в белках и пептидах. ВЭЖХ используется в клинических анализах для мониторинга лекарственных средств в организме больного. Анализ на кате-холамины, которые выполняют в организме роль нейромедиаторов, обычно проводят методом обращеннофазовой ВЭЖХ с применением электрохимического детектора. С помощью ВЭЖХ можно быстро осуществить анализ на изофер-менты. Этот анализ, например, очень важен для оценки повреждений сердечной мышцы после инфаркта. Жидкостную хроматографию применяют для выявления полярных и высокомолекулярных соединений в сточных водах и отходах производства, а обращеннофазовую ВЭЖХ рекомендуют для разделения и обнаружения фенолов в водопроводной воде. [50]
Согласно требованиям Ф-VIII нерадиоактивный метионин, а следовательно, и меченый, как всякий лекарственный препарат должен быть проверен на тождественность и доброкачественность. Литературные данные [1, 2, 3] показывают, что исследователи применяли различные вещества в качестве реагентов на аминокислоты, причем большинство методов анализа аминокислот предусматривало решение специфической задачи, касающейся в основном анализа белка. По анализу же аминокислот, меченных радиоактивными изотопами, в том числе и метионина с изотопом S35, литературные данные совсем отсутствуют. [51]
Следует ожидать, что количество амидного азота, найденное с помощью этого метода, должно быть близким к теоретически вычисленному. При анализе аспарагина и других трудно гидролизуемых амидов, экспериментально найденное количество азота всегда более занижено по сравнению с теоретически вычисленным - чем при анализе глутамина, ацетамида, а также других малоустойчивых веществ. Имеются указания, что это относится также к анализу белков. Если анализируемый образец содержит большое количество мочевины, желательно предварительно выделить ее из раствора или ввести в результат анализа соответствующую поправку, которую вычисляют, определяя аммиак, образующийся в контрольном растворе, имеющем приблизительно такую же концентрацию мочевины. Вероятно, мочевину следует разлагать с помощью уреазы и удалять аммиак из раствора, пропуская через него пузырьки воздуха. Перед гидролизом раствор должен быть сделан щелочным путем добавления буры. Если в анализируемом образце содержится аммиак в виде ионов аммония, следует определить содержание азота аммиака и вычесть это количество из результата определения амидного азота. Кроме того, от аммиака, содержащегося в растворе в виде аммонийных солей, можно освободиться, добавляя к раствору щелочь и пропуская через него перед гидролизом струю воздуха. При этом следует иметь в виду, что при длительном нахождении амида в щелочной среде может иметь место также и его гидролиз, поэтому эту операцию следует проводить как можно быстрее и избегать избытка щелочи. [52]