Cтраница 1
Обработка белков горячей кислотой дает смеси аминокислот, природа которых может быть установлена либо косвенными способами, либо с использованием современной техники разделения. [1]
Обработка белков 6 М НС1 при 110 С в вакууме приводит к гидролизу пептидных связей, но одновременно с этим происходит разложение триптофана, гидролиз аспарагина и глутамина соответственно до аспарагиновой и глутаминовой кислот, а также частичное разложение серина, треонина, цист ( е) ина. Пептидные связи между аминокислотами с объемистыми боковыми группами, такими как Не и Val, более устойчивы к гидролизу. Хорошо известно, что гидролизуя образцы белков в течение 1, 2 и 3 дней, необходимо экстраполировать количество таких аминокислот, как Ser и Thr к нулевому времени, а Не и Val - к бесконечному. В случае цист ( е) ина целесообразно перед гидролизом либо окислить его в цистеиновую кислоту, либо превратить в S-карбоксиметилци-стеин или 4-пиридилэтилцистеин ( см. разд. Обычно, в особенности если белок содержит углеводы, образуются продукты осмоления. После гидролиза соляную кислоту лучше удалить, так как она мешает при последующем разделении аминокислот. [2]
Обработка белков горячей кислотой дает смеси аминокислот, природа которых может быть установлена либо косвенными способами, либо с использованием современной техники разделения. [3]
При обработке белка здесь образуется 2 4-динитрофенилено-вый мостик между двумя свободными аминогруппами. Образование такого мостика между ос-аминогруппой Gly A1 и е-амино-группой Lys B29 в инсулине свидетельствует о большой гибкости этих полипептидных цепей в растворе. [4]
При обработке белка концентрированной азотной кислотой происходит окрашивание препарата в желтый цвет, обусловленный образованием соответствующих ароматических нит-ропроизводных. Последующая обработка его водным раствором аммиака или щелочи вызывает появление оранжевой окраски. [5]
При обработке белков пероксидом водорода Н2С2 последний реагирует преимущественно с CyS-SyC, Cys и Met. В присутствии переходных металлов окислению могут подвергаться также боковые заместители Try, Туг и др. Одновременно ускоряются процессы гидролитической деструкции полипептидных цепей: фиброин и кератин полностью растворяются ( с деструкцией) в 3 % - м растворе Н2О2 при 60 С в течение трех дней. [6]
При обработке белка или пептида безводным гидразином при нагревании ( 100 С) происходит гидролиз полипептидной цепи. [7]
Получают обработкой гидролнзованного белка нитратом серебра. NaCl, CaC 2 и др.) подвергают гидролн водой при 1 5 - 2 от до получения жидкого раствора. Последний подв гаюг гидролизу 16 - 20 % - ным раствором едкого натра при 80 - 85е до крашения выделения аммиака и после фильтрации ( сквозь фланель) кс центрированию до уд. [8]
Наиболее предпочтительной является обработка белка негашеной известью СаО, так как при нейтрализации серной кислотой H2SO4 в осадок выпадают такие вещества, как гипс CaSO4, и вследствие незначительной диссоциации солей в пенообразователе остается только минимум растворимого электролита. [9]
Лоран и Дерриан [49] после обработки белка гидразином в течение 17 ч при 100 С смогли выделить примерно 1 моль ДНФ-ацетилгидразида. Эти результаты свидетельствуют о том, что у большинства ( если не у всех) форм карбоангидразы N-кон-цевая аминокислота ацетилирована. [10]
Тироксин легко образуется in vitro при обработке белков, например казеина, йодом в слабощелочном растворе. Тироксин получается также окислением дийодтирозина перекисью водорода в щелочном растворе. Тироксин образуется, вероятно, этим путем и в биологических условиях в щитовидной железе. Протекание этого биологического синтеза было подтверждено введением радиоактивного изотопа йода, который обнаруживается затем в тироксине. Однако введенный в организм йод быстро восстанавливается в ионы йода, не взаимодействующие с белками. Следовательно, необходимо принять, что в щитовидной железе существует ферментативная система, способная превращать ионы йода в элементарный йод, который только и взаимодействует с белками. [11]
Реакция Сакагучи - появление малиново-красного окрашивания при обработке белка сначала гипохлоритом натрия, а затем раствором - нафтола. Она указывает на присутствие в белке гуани-динной группировки, входящей в состав аргинина. [12]
Валасек и Хаггинс [2411] обнаружили, что при обработке белков плазмы сырыми препаратами а-амилазы образуется пептид, обладающий гипертензивной активностью; этот пептид был назван веществом А. Позднее было показано [1077, 2411, 2412], что вещество А не образуется в присутствии ингибиторов а-амилазы. В то же время кристаллические препараты ос-амилазы, выделенные из различных источников, не всегда приводят к образованию вещества А. Эти результаты позволили предложить двухстадийный механизм процесса образования вещества А, в котором принимают участие не тодько ос-амилаза, но и протео-литические ферменты, присутствующие в качестве примесей в сырых препаратах амилазы. [13]
Возможно идентифицировать и смеси коротких пептидов, получаемых после обработки белков ферментами, частичного разделения с помощью гель-фильтрации и ионообменной хроматографии. Сопоставление масс-спектров, полученных при различных температурах источника, а также использование полного метилирования и дейтерометилирования, обычно позволяют правильно идентифицировать пики исходных пептидов. [14]
Другой метод ( Эдман, 1949 г.) состоит в обработке белка фенилизотио-цианатом, который со свободными аминогруппами образует производные тпомочевины. [15]