Cтраница 2
Ее можно вызвать самыми разнообразными приемами: повышением или понижением температуры, обработкой белка различными реагентами, действием коротковолнового излучения и проч. [16]
Метод основан на открытии Акабори с сотрудниками [13], которые показали, что при обработке белка безводным гидразином С-кон-цевые аминокислоты отщепляются в свободном виде. Все другие аминокислоты, участвовавшие в образовании пептидных связей, превращаются в гидразиды аминокислот, которые могут вступать в реакцию конденсации с бензальдегидом с образованием дибензаль-ных производных, нерастворимых в воде. [17]
Гидролизу трипсином могут подвергаться связи, образованные и остатками цистеина, после превращения его в аминоэтилцистеин обработкой белка этиленимином. [18]
На основании результатов модельных исследований с аминокислотами Нейбергер [95] пришел к выводу о том, что при обработке белков кетеном в щелочном растворе ацетилируются амино -, тио - и фенольные группы, в то время как гуанидинные и алифатические гидроксилыные группы в реакцию не вступают. Суммируя недостатки кетена как реагента для белков, Олькотт и Френкель-Конрат [19] отмечают, что 1) Действие кетена является недостаточно специфичным по отношению к аминогруппам; 2) ( взаимодействие его с этим типом групп обычно не доходит до конца; 3) будучи нестойким газом, кетен требует использования специальной аппаратуры для своего получения, с трудом может применяться в точно отмеренных количествах и обнаруживает склонность к поверхностному денатурированию чувствительных к такому воздействию белков. Кроме того, еще один недостаток кетена заключается, повидимому, в его исключительной токсичности. [19]
Харуна и Акабори [21 ] выделили 35 кислых ДНФ-производных пептидов после частичного гидразинолиза овальбумина ( 20 г.), в результате обработки белка гидразином ( 100 г) при 100 в течение 3 час. В этих условиях только 0 3 моль С-концевой аминокислоты было обнаружено в свободном виде. Оказалось, что большие количества ДНФ-пептидов лучше предварительно разделять методом противоточного распределения, а затем применять хроматографию на колонках. [20]
Исходя из данных по изучению вторичной и третичной структуры белков оптическими и гидродинамическими методами [47], естественно полагать, что состояния спин-меченого фрагмента полипептидной цепи после обработки белка мочевиной и диоксаном отличаются отсутствием или наличием а-спиральной структуры. Наличие вторичной структуры существенно увеличивает жесткость спин-меченого участка цепи макромолекулы, а потому подвижность парамагнитной метки в присутствии мочевины значительно больше, чем в присутствии диоксана. [21]
Лизин был впфвые выделен из гидролизата казеина Дрексе-лем [67] в 1889 г. Дрексель предполагал, что лизин представляет собой диамин; правильная структура была установлена в 1902 г. Фишером и Вайгертом [68], которые синтезировали лизин и показали, что синтезированный продукт идентичен рацемизированному природному материалу. При обработке белков азотистой кислотой свободные е-аминогруппы лизина превращаются в гидроксилыше группы; по-видимому, у лизина, связанного в белках, большинство е-аминогрупп, если не все, находятся в свободном состоянии ( см., однако, стр. Лизин, связанный по s - NH2 - rpynne, содержится в биоцитине. [22]
Исключение составляют связи метионина с серином и треонином, расщепляющиеся лишь частично. В условиях обработки белка бромцианом может иметь место частичный гидролиз связи Asp Pro, неустойчивой в кислой среде. [23]
Он состоит в обработке белка или осколочного фрагмента 2 4-динитрофторбензолом. [24]
Метод применялся главным образом для определения размеров больших молекул, например белков. Обычная процедура состоит в обработке белка флуоресцирующим реагентом, необратимая реакция с которым дает флуоресцирующую полимерную молекулу. Нужные реагенты чаще всего получают, вводя изо-цианатные, изотиоцианатные или сульфохлоридные группы в обычные флуоресцирующие соединения. Хорошо взаимодействуют с белком, например, изоцианаты флуоресцеина, родамина Б и антрацена. Флуоресцирующие изоцианаты необратимо реагируют со свободными амино - или сульфгидрильными группами белка. Очевидно, что и реагенты и условия реакции следует подбирать так, чтобы размер и физическое строение молекулы белка изменялись в минимальной степени. Обычно времена жизни полученных этим способом флуоресцирующих конъюгатов белков близки к временам жизни простых флуоресцирующих молекул. [25]
Ацильная миграция была положена в основу разработки химического метода специфического расщепления пептидной цепи по амидным связям, образованным остатками серина или треонина. Методика, нашедшая применение в случае фиброина шелка, состоит в обработке белка концентрированной серной кислотой. Образующиеся в результате такой обработки аминогруппы алкилируют 2 4-динитрофторбензолом и аминокислоты определяют в виде динитрофенильных производных ( [660]; ср. [26]
Рассматривая белковый состав человеческого организма ( включая волосы, ногти, мышцы, соединительные ткани), мы вправе предположить, что молекулы, составляющие сложный организм, имеют сложную природу. В таком случае необходимо исследовать природу этих молекул жизни. При обработке белка раствором кислоты или основания вместо исходной молекулы белка возникает раствор, содержащий много более простых, гораздо меньших по размеру молекул - аминокислот. [27]
Первичная структура белков устанавливается методами химической деструкции. Он состоит в обработке белка 2 4-динитрофторбензолом. [28]
Протеинат серебра сильного действия представляет собой коричневый порошок, легко растворимый в воде, но не растворимый в спирте. Он содержит около 8 % серебра. Препараты этого типа изготовляются путем обработки очищенного белка серебряной солью ( например, нитратом серебра), растворения осадка после промывания его избытком водного раствора белка и упаривания раствора досуха при уменьшенном давлении. [29]
Однако при этом следует всегда помнить, что результаты таких измерений сильно зависят именно от примененного метода. Возможны, например, случаи, когда определенная обработка белка коренным образом изменяет его биологическую активность, тогда как самые тонкие физические методы не обнаруживают при этом каких-либо нарушений структуры в целом или отдельных ее деталей. [30]