Объем - препарат
Cтраница 2
Их определяют по кривой эффективности, построенной для применяемого детектора и конкретной используемой геометрии на основе измерений с набором ОСГИ; р, робр - выходы гамма-квантов для радионуклидов, входящих в измеряемый препарат и образцовый источник соответственно; Kip - объем препарата, содержащийся в измеряемой пробе ( с учетом разбавления), в миллилитрах. [16]
Препарат на огне не плавится, а гексахлоран сгорает небольшим, быстро затухающим пламенем. Объем препарата после сожжения почти не уменьшается. [17]
При аналитических определениях все условия калибровочных опытов no - возможности должны быть воспроизведены. Это прежде всего относится к объемам препаратов и геометрическим условиям, а также к интервалам времени, энергии активирующего излучения и некоторым другим факторам. В методе мониторов любые изменения указанных параметров сразу же скажутся на конечном результате и возникнет необходимость введения соответствующей поправки или корректировки схемы анализа. Так же как и в методе эталонов, здесь трудно учесть влияние матрицы, В остальном действие экспериментальных факторов такое же, как и в случае калибровочных опытов. [18]
Денситометры, флюориметры и коллекторы фракций были описаны в гл. Так как в случае ионообменной хроматографии объем препарата, особенно при градиентной элюции, может быть значительным, принято сбор и нумерацию фракций начинать с момента внесения препарата на колонку. [19]
Что касается самого хроматографического процесса, то контроль за ним сводится к поддержанию постоянства выбранной скорости элюции и сбору фракций. Соображения о выборе размеров колонки, объема препарата, типа элюента и скорости элюции даны в следующем разделе. Здесь, пожалуй, имеет смысл только упомянуть о технически своеобразном микроварианте гель-фильтрации с использованием центрифугирования. Наконечник эппендорфов-ской пипетки [ Gorray, Quay, 1977J или баллончик пластикового шприца на 1 мл [ Krauth, Werner, 1979 ] заполняют суспензией се-фадекса G-25, закрыв отверстие кусочком стеклянной ваты. Эту колонку тем или иным способом закрепляют в центрифужной микропробирке ( или пробирке) так, чтобы кончик не доставал дна. Центрифугированием в роторе с откидными стаканчиками при ускорении lOOOg в течение 5 - 10 мин удаляют буфер из свободного объема между гранулами. [20]
Выбор длины и диаметра колонки определяется объемом препарата и задачей, стоящей перед гель-фильтрацией в данном опыте. При обессоливании, смене буфера и рассортировке молекул объем препарата может составлять 20 - 25 % полного объема колонки ( Vt), чем и определяется выбор последнего. Что же касается отношения высоты колонки к ее диаметру, то оно может составлять 10: 1 и ниже. В лаборатории для этих целей нередко изготавливают еще более широкие и короткие колонки. С их помощью простые операции обессоливания или рассортировки молекул осуществляются быстро. Разбавление препарата при этом оказывается очень незначительным ( на 10 - 20 %), так как хроматографические зоны имеют протяженные площадки и расширение зон идет только за счет участков переднего и заднего фронтов. [21]
Фосфоресценция ZnS не испытывает, как было установлено нами, никаких изменений при напускании одной атмосферы хлора. Очевидно, центры фосфоресценции расположены главным образом в объеме препарата и недоступны газовым молекулам. Отрицательный результат дали также опыты с некоторыми адсорбентами, в которых центры флуоресценции были заведомо расположены на поверхности. [22]
 |
Кинетика аффинного связывания лактатдегидро-геназы на 5 - АМР-сефарозе [ Turkova, 1978 ]. [23] |
Например, для сорбента с [ / Л 2 - 10: i М ( 2 мкмол / - лиганда в 1 мл сорбента), приняв [ Еп ] 0 02 - [ LJ 4 - 10 - 5 М, и белка с молекулярной массой 100 000 Дальтон найдем, что допустимая концентрация белка в сорбенте - примерно 4 мг / мл. Отсюда легко рассчитать объем колонки для заданного количества белка или объем препарата по известной исходной концентрации белка в растворе и объему колонки. [24]
По оси абсцисс легко подсчитать, что объем раствора гемоглобина в ходе очистки практически не увеличился. Для сравнения на том же рисунке пунктиром показан вариант обессоли-вания при аналитическом соотношении объемов препарата и колонки. [25]
Стараются, чтобы при обычной TGX диаметр пятна или ширина полосы препарата на старте не превышали 3 мм; это заставляет ограничивать однократно вносимый в пятно объем препарата примерно до 2 мкл. Минимальный объем определяется необходимой точностью дозировки - для обычной TGX он, как правило, должен быть не менее 0 2 мкл. Если необходимо нанести большие, чем указано, объемы, то можно прибегать к повторному нанесению раствора препарата в одно пятно ( или неоднократному прочерчиванию полосы) с промежуточным подсушиванием. [26]
Однако в лабораторной практике проще проводить относительные измерения, когда активность исследуемого препарата сравнивается с активностью эталона с известным содержанием радиоактивного изотопа [ распад / ( сек-г) или имп / ( сек-г) ] или активностью другого исследуемого препарата. Если активности препаратов и эталона измеряют в строго одинаковых условиях ( один и тот же детектор и прибор для измерения, одинаковое положение по отношению к детектору, одно и то же вещество, подготовленное для измерения одинаковым способом и равномерно распределенное по объему препарата, слой которого имеет одинаковую толщину и нанесен на одинаковую подложку), то все поправочные коэффициенты сокращаются, и из отношения измеренных активностей можно найти по формуле ( 5) абсолютную активность препарата. [27]
Однако в лабораторной практике проще проводить относительные измерения, когда радиоактивность исследуемого препарата сравнивается с радиоактивностью эталона с известным содержанием радиоактивного изотопа [ распад / ( с-г) или имп / ( с-г) ] или активностью другого исследуемого препарата. Если радиоактивности препаратов и эталона измеряют в строго одинаковых условиях ( один и тот же детектор и прибор для измерения, одинаковое положение по отношению к детектору, одно и то же вещество, подготовленное для измерения одинаковым способом и равномерно распределенное по объему препарата, слой которого имеет одинаковую толщину и нанесен на одинаковую подложку), то все поправочные коэффициенты сокращаются, и из отношения измеренных радиоактивностей можно найти по формуле ( 5) абсолютную радиоактивность препарата. [28]
Для разделения близких по своим хроматографическим свойствам веществ используют изократическую элюцию - раствором неизменного состава. Этот вариант элюции дает наилучшее разрешение пиков, однако нередко - за счет увеличения длительности хроматографии и объема разделяемых фракций по сравнению с градиентными методами элюции. Объем препарата при изократической элюции не должен превышать 1 - 5 % объема колонки, так как вещество в этом случае, сорбируясь не слишком прочно, не будет существенно концентрироваться в верхней части колонки во время сорбции. [29]
При сорбции вещества на иоио-обменнике решающую роль играет концентрация конкурирующих ионов, а объем исходного раствора вовсе не играет роли. Поэтому нередко перед концентрированием раствора амфолита ( особенно после предшествовавшей стадии хроматографическои очистки, на которой элюцшо проводили солевым раствором) препарат приходится еще разбавлять ( нередко в 10 и более раз) водой или слабым буфером и в таком виде сорбировать на концентрирующую ионообменную колонку. Хотя объем препарата при этом может во много раз превышать объем колонки, вещество сорбируется тонким слоем в верхней ее части, откуда затем выбивается малым объемом нередко той же самой соли и в той же концентрации, что была в растворе препарата до его разбавления. [30]
Страницы: 1 2 3