Биогель

Cтраница 4

Для биогелей Р-2, Р-4, Р-6 определен по пептидам, для всех остальных биогелей - по глобулярным белкам. [46]

Все марки биогеля выпускаются с размерами гранул 50 - 100, 100 - 200, 200 - 400 и 400 меш. [47]

Батгейт [21] указывал на недостаток биогеля Р-300, состоящий в том, что при использовании дозирующего насоса происходит значительное уплотнение этого геля. Гель агарозы ( биогель А, 0 5 М, 200 - 400 меш) не уплотняется до такой степени, и, несмотря на то что агароза является углеводом, она оказалась наиболее подходящей для автоматической системы определения молекулярных масс. Колонка 30X0 9 см, предварительно обработанная дихлордиметилсиланом, была наполнена биогелем А ( 0 5 М, 200 - 400 меш) согласно заводской инструкции. Перед использованием колонку в течение нескольких дней промывали раствором хлорида ртути ( II) для того, чтобы вытеснить азид натрия, являющийся антикоагулянтом геля агарозы, поскольку азид сильно мешает использованию орсина для детектирования. Хлорид ртути ( II) выполняет двойную роль: антикоагулянта и подвижной фазы. [48]

Из перечня носителей, приведенного в разд. Хорошо известны промышленные препараты сефароза и биогель А. Сефароза продается в набухшем состоянии, суспендированная в дистиллированной воде, содержащей 0 02 % азида натрия в качестве бактериостатического агента. [49]

Графики селективности биогелей серии Р. [50]

Однако следует помнить, что дезамидироваиие акрил амида приводит к появлению дополнительных карбоксилов. Между тем, фирма утверждает, что эти биогели можно автоклавировать, а экспериментаторы ( по аналогии с принятой для сефадексов практикой, см. ниже) для ускорения набухания нередко кипятят их в воде; этого, очевидно, делать не следует. Гидрофобная сорбция на биогелях происходит примерно так же, как на сефадексах. Есть и недостатки: как видно из изложенного, биогели химически менее стойки. Колонки, заполненные крупнопористыми биогелями, менее чувствительны к перепадам давления, но элюент через них ( при одинаковых перепадах) течет медленнее, чем через колонки сефадекса с аналогичными хро-матографическими параметрами. Вообще говоря, колонки биогелей любых номеров - более медленные, чем колонки соответствующих сефадексов. [51]

Фракционирование займет меньше времени, а разрешение пиков от этого выиграет; кроме того, улучшатся условия для сохранения биологической активности. Ультрогели серии АсА, а также сефадексы и биогели серии Р средней и крупной пористости могут в этом плане оказаться наиболее подходящими матрицами, так как пределы исключения для них ниже, чем у других сефадексов и гелей агарозы. [52]

Жесткость матриц ультрогелей серии АсА дает им преимущества перед биогелями серии Р, однако в том, что касается возможности работать при повышенной температуре, для них сохраняются ограничения, свойственные ага-розе. Химическая стойкость этих ультрогелей определяется совокупностью уязвимых мест полиакриламида и агарозы. [53]

Непрореагировавший малеиновый ангидрид гидролизуется в; водном растворе и дает матрицу полианионной природы. Широко применяемые в настоящее время нейтральные носители типа, сефарозы или биогеля не обладают такими анионными свойствами. Сополимер этилена и малеинового ангидрида выпускается. [54]

Для характеристики величины молекулярной массы широко используются химические методы, основанные на определении восстанавливающей способности полисахарида. Распространено определение молекулярных масс полисахаридов с помощью молекулярных сит - сефадексов, биогелей. [55]

Разделение пептидов методом i ь фильтрации. [56]

Они хороню набухают в воде, образуя гели, которые действуют подобно молекулярному ситу. В настоящее время выпускается более 20 типов сефадексов и более 30 типов биогелей, различающихся частотой поперечных сшивок и размером гранул. Выбор носителя для хроматографической колонки определяется молекулярной массой разделяемых пептидов. [57]

Поскольку максимальная скорость потока на агарозе сравнительно низка, не рекомендуется применять очень длинные колонки. Эти ограничения не касаются сефарозы ( Sepharose, фирма Pharmacia) и биогеля А, которые настолько эластичны, что столбик геля сжимается при увеличении скорости потока. Эти гели необходимо оберегать от контакта с органическими растворителями или другими денатурирующими агентами ( например, мочевиной), поскольку в таком случае структура геля необратимо нарушается. При применении высококонцентрированных солевых растворов следует на небольшой пробе предварительно убедиться в том, что они не разрушают гель. Для предохранения геля от зарастания в элюент всегда следует вводить 0 02 % азида натрия. [58]

В этом случае к раствору белка, содержащему восстановители, добавляют ДТНБ так, чтобы конечная концентрация реагента в 5 - 10 раз превышала суммарную концентрацию тиолов в инкубационной среде. После окончания реакции смесь подвергают гель-фильтрации на колонке с сефадексом G-50 или биогелем Р-10 и отделяют белок от смеси низкомолекулярных соединений. К раствору белка, сульфгидрильные группы которого модифицированы ДТНБ, добавляют 3 - 5-кратный молярный избыток дитиотреитола. Концентрацию освобождающегося аниона 2-нитро - 5-тиобензоата определяют по поглощению при 412 нм. [59]

Страницы: 1 2 3 4