Определение - аминокислотная последовательность
Cтраница 4
Методом рентгеноструктурного анализа было исследовано большое число кристаллических ферментов. Результаты таких исследований часто сопоставляются с данными, полученными химическими методами при 1) определении аминокислотной последовательности ферментов, 2) изучении их субстратной специфичности, 3) исследовании действия; специфических ингибиторов и 4) идентификации специфических функциональных групп в активном центре. Здесь показаны изображения ( в масштабе) молекул трех ферментов, иллюстрирующие некоторые их структурные и функциональные особенности, выявленные при рентгено-структурном анализе кристаллов этих ферментов. [46]
Полный ферментативный гидролиз белков осуществить трудно, так как большинство протеиназ атакует с достаточно большой скоростью только определенные типы связей ( см. гл. Метод ферментативного гидролиза применяется с большим успехом в тех случаях, когда необходимо провести частичный гидролиз, например при определении аминокислотной последовательности белка ( см. гл. [47]
Два года трудились они над точной идентификацией фрагментов и их правильным воссоединением в единую структуру, и к 1952 году работа над определением аминокислотной последовательности А - и Б - цепей инсулина была завершена. Затем было выяснено, каким образом две цепи соединяются друг с другом. [48]
Так, судя по структуре, в нитро - и арсанилазо-карбоксипептидазах заместители присоединены к остатку Туг-248. Сообщение [114] о том, что спектры тетразолилазо - КПА, в которой модифицирован не остаток 248 [105], тоже изменяются в присутствии глицилтирозина, подчеркивает необходимость определения аминокислотной последовательности соответствующих пептидов в различным образом модифицированной КПА. [49]
До работы Сэнгера, на выполнение которой ушло несколько лет, не было уверенности в том, что все молекулы данного белка являются строго идентичными по молекулярной массе и аминокислотному составу. В настоящее время известна аминокислотная последовательность многих сотен белков, выделенных из различных источников. Определение аминокислотной последовательности полипептидной цепи основано на принципах, которые впервые были развиты Сэнгером. [51]
 |
Определение С-концевой последовательности пептида с помощью кар-боксипептндаз. [52] |
Существует группа ферментов, которые при гидролизе пептидов и белков отщепляют N - или С-концевые дипептидные фрагменты. К ним относятся катепсин С, или дипептидиламинопептидаза I ( ДАП 1), и катепсин В, или дипептидилкарбокс и пептида за. Процесс определения аминокислотной последовательности с помощью этих ферментов состоит из нескольких стадий: I) гидролиз исследуемого соединения соответствующей дипептидазой, 2) разделение и идентификация отщепленных пептидов, 3) определение порядка расположения дипептидов в полипептидной цепи исследуемой молекулы. [53]
Поперечные - S-S - связи образуются в белках в тех случаях, когда два остатка цистеина в одной и той же цепи или в разных цепях подвергаются действию окислителя. При определении аминокислотной последовательности белка по ряду практических соображений сначала следует разорвать все - S-S - связи. Поскольку это процесс, обратный окислению, его проводят при помощи восстановителя. [54]
В молекуле гемоглобина эти цепи не соединены ковалентными связями, но тесно ассоциированы друг с другом посредством водородных связей и гидрофобных взаимодействий ( гл. После разделения а - и р-глобинов их аминокислотные последовательности были установлены двумя группами исследователей в Соединенных Штатах и одной-в ФРГ. Многие стадии, через которые проходит определение аминокислотной последовательности длийных полипептидных цепей, и одновременная регистрация всех полученных результатов осуществляются в настоящее время автоматическими аминокислотными анализаторами с программным управлением. [56]
Метод ВЭЖХ благодаря своей высокой разрешающей способности и скорости сейчас применяется для выделения и анализа белков. Этим методом также успешно выполняется анализ аминокислот при определении аминокислотных последовательностей в белках и пептидах. ВЭЖХ используется в клинических анализах для мониторинга лекарственных средств в организме больного. Анализ на кате-холамины, которые выполняют в организме роль нейромедиаторов, обычно проводят методом обращеннофазовой ВЭЖХ с применением электрохимического детектора. С помощью ВЭЖХ можно быстро осуществить анализ на изофер-менты. Этот анализ, например, очень важен для оценки повреждений сердечной мышцы после инфаркта. Жидкостную хроматографию применяют для выявления полярных и высокомолекулярных соединений в сточных водах и отходах производства, а обращеннофазовую ВЭЖХ рекомендуют для разделения и обнаружения фенолов в водопроводной воде. [57]
Страницы: 1 2 3 4