Cтраница 3
Следующая стадия в построении большого пептида - удаление одной из защитных групп, в результате которой цепь может быть удлинена. Например, при удалении ( N-защитной группы и последующей реакции с другой N-защищенной аминокислотой и ДЦГК достраивается N-конец, а С-концевой остаток остается прежним. Процесс повторяют до тех пор, пока не будут присоединены все необходимые остатки. [31]
Изучение биологической активности аналогов Уа15 - ангиотен-зина II с укороченной пептидной цепью стало возможным благодаря тому, что соединения, отличающиеся от Уа15 - ангиотен-зина II отсутствием одного или двух аминокислотных остатков с N-конца или одного С-концевого остатка, легко получаются или из промежуточных веществ в синтезе гормона, или путем ферментативного расщепления последнего. Аналоги Уа15 - ангио-тензина II с удлиненной по N-концу пептидной цепью еще не получены. Однако описано соединение, представляющее собой Уа15 - ангиотензин II с двумя аминокислотными остатками, присоединенными к карбоксильному концу гормона; это соединение можно рассматривать и как аналог Уа15 - ангиотензина I. Сообщалось также о синтезе гомолога ангиотензина, в котором добавочная аминокислота находится в середине цепи. [32]
Френкель-Конрат при отщеплении N-концевых аминокислот по способу Эдмана ( см. стр. Этим методом было подтверждено наличие С-концевого аланина у альбумина сыворотки крови лошади. Фокс и др. показали [51], что аминокислоты ли-зоцима ( кроме С-концевого остатка) не разрушаются при обработке по методу Шлака и Кампфа; точный аминокислотный анализ после кислотного гидролиза показал потерю 1 остатка лейцина на 1 моль лизоцима ( мол. [33]
В обзоре Фрутона [722] приведены первые данные о попытках получения пролинсодержащих пептидов. Карбобензокси-ь-про - лин [5, 7, 179, 850, 934, 1091, 1863, 1886] остается и после разработки современных методов синтеза пептидов наиболее важным исходным соединением для получения пролилпептидов. Если одним из компонентов пептидного синтеза является высший полипептид с пролином в качестве С-концевого остатка, то наиболее часто применяют карбодиимидный метод и метод смешанных ангидридов. [34]
В обзоре Фрутона [722] приведены первые данные о попытках получения пролинсодержащих пептидов. Карбобензокси-ь-про - лин [5, 7, 179, 850, 934, 1091, 1863, 1886] остается и после разработки современных методов синтеза пептидов наиболее важным исходным соединением для получения пролилпептидов. Если одним из компонентов пептидного синтеза является высший полипептид с пролином в качестве С-концевого остатка, то наиболее часто применяют карбодиимидный метод и метод смешанных ангидридов. [35]
Определение числа и природы С - и N-концевых аминокислотных остатков позволило добиться существенных успехов в выяснении структуры некоторых белков. Более короткая цепь ( по обозначению Сангера - пептид А) имеет N-концевой остаток глицина и С-концевой остаток аспарагина. В более длинной цепи ( пептид В) N-концевой аминокислотой оказался фенил-аланин, а на С-конце цепи находится аланин. [36]
Однако Ишии и Виткоп [1086] вместо указанных выше 2 молей L-валина обнаружили в гидролизате 0 4 моля изолейцина и 1 6 моля ва - - лина, в результате чего они пришли к выводу, что грамицидин А, по-видимому, представляет собой смесь валин-грамицидина и изолейцин-грамицидина. При более детальном изучении строения грамицидина А в нем не было найдено свободных карбоксильных и аминогрупп; в то же время доказано наличие в молекуле одной свободной гидроксильной группы. Однако, согласно более поздним исследованиям Сарджеса и Виткопа [ 19116, 1911в, 2764 ], Val1 - грамицидин А представляет собой линейный пентадекапептид, у которого N-концевой остаток валина несет М - формильную - группировку, а С-концевой остаток триптофана - этаноламид-ную группу. В молекуле Пеи грамицидина А N-концевой остаток валина заменен остатком изолейцина. [37]
Нонапептиды, полученные двумя различными путями, не отличались друг от друга ни по аналитическим данным, ни лю биологической активности. При инкубировании с химотрипсином легко происходило отщепление 1 моля аргинина, а последующий разрыв пептидной связи Phe5 - Ser6, приводящий к образованию H-Arg-Pro-Pro-Gly-Phe-OH и H-Ser-Pro-Phe-OH, протекал значительно медленнее. Карбоксипептидаза отщепляла только С-концевой остаток фе-нилаланина ( Phe8) у октапептида, образовавшегося при инкубировании с химотрипсином. [38]
Наконец, карбоксипептидаза поджелудочной железы может специфически отщеплять С-концевой остаток. Будучи простым и удобным, этот ферментативный метод мог быть применен к пептидам и белкам. Однако его ограничения совершенно очевидны. Сродство карбоксипептидазы к С-концевым связям зависит от химической природы С-концевого остатка и, возможно, также от природы второго соседнего остатка. Таким образом, должны быть сделаны следующие заключения: а) карбоксипептидаза может не отщепить аминокислоту, даже если в молекуле пептида действительно имеется С-концевой остаток; б) возможно почти одновременно отщепление первой и второй аминокислоты; в) в случае белков, содержащих более чем одну полипептидную цепь, вторая аминокислота первой цепи может выделиться прежде, чем первая аминокислота прочих цепей. [39]
Наконец, карбоксипептидаза поджелудочной железы может специфически отщеплять С-концевой остаток. Будучи простым и удобным, этот ферментативный метод мог быть применен к пептидам и белкам. Однако его ограничения совершенно очевидны. Сродство карбоксипептидазы к С-концевым связям зависит от химической природы С-концевого остатка и, возможно, также от природы второго соседнего остатка. Таким образом, должны быть сделаны следующие заключения: а) карбоксипептидаза может не отщепить аминокислоту, даже если в молекуле пептида действительно имеется С-концевой остаток; б) возможно почти одновременно отщепление первой и второй аминокислоты; в) в случае белков, содержащих более чем одну полипептидную цепь, вторая аминокислота первой цепи может выделиться прежде, чем первая аминокислота прочих цепей. [40]
Обсудим последовательные стадии определения первичной структуры небольшого пептида; для белка эта процедура аналогична, но более громоздка. Сначала необходимо выяснить, какие аминокислоты находятся на концах цепи. Обратите внимание, что на рис. 40.1 одна концевая аминокислота содержит свободную а-аминогруппу, а другая концевая аминокислота - свободную а-карбоксильную группу. Эти аминокислотные остатки называют соответственно N-концевым и С-концевым. В соответствии с методикой, разработанной Сенджером в его работе с инсулином, сначала используется 1-фтор - 2 4-динитробензол, который образует стабильное динитрофенильное производное с N-концевым остатком. После кислотного гидролиза модифицированная аминокислота отделяется и идентифицируется. Определение С-концевого остатка можно провести с помощью осторожной обработки ферментом карбоксипептидазой, которая специфически катализирует гидролиз С-концевой пептидной связи, отщепляя от полипептидной цепи единственную аминокислоту. Существуют также и другие методы определения N - и С-конце-вых аминокислотных остатков, но два описанных являются наиболее распространенными. [41]
Обсудим последовательные стадии определения первичной структуры небольшого пептида; для белка эта процедура аналогична, но более громоздка. Сначала необходимо выяснить, какие аминокислоты находятся на концах цепи. Обратите внимание, что на рис. 40.1 одна концевая аминокислота содержит свободную а-аминогруппу, а другая концевая аминокислота - свободную сс-карбоксильную группу. Эти аминокислотные остатки называют соответственно N-концевым и С-концевым. В соответствии с методикой, разработанной Сенджером в его работе с инсулином, сначала используется 1-фтор - 2 4-динитробензол, который образует стабильное динитрофенильное производное с N-концевым остатком. После кислотного гидролиза модифицированная аминокислота отделяется и идентифицируется. Определение С-концевого остатка можно провести с помощью осторожной обработки ферментом карбоксипептидазой, которая специфически катализирует гидролиз С-концевой пептидной связи, отщепляя от полнпептидной цепи единственную аминокислоту. Существуют также и другие методы определения N - и С-конце-вых аминокислотных остатков, но два описанных являются наиболее распространенными. [42]