Отделение - белок
Cтраница 1
Отделение белка в случае малых объемов крови или других физиологических материалов может производиться ультрамикро-методом точно так же, как и макрометодами при работе с макроколичествами этих материалов. При работе ультрамикрометодом все объемы должны быть соответственно уменьшены, а вместо от-фильтровывания осажденного белка удобнее применять центрифугирование. [1]
Отделение белка чаще всего выполняют в пробирке, изображенной на рис. 52, которая должна быть удобной для помещения в микроцентрифуге. Если же объемы очень малы, то работают с пробиркой, изображенной на рис. 51 ( крайняя справа), которая специально предназначена для центрифугирования с помощью вышеописанной воздушной центрифуги. Максимальный конечный объем раствора, с которым удобно загружать воздушную центрифугу, составляет 0 1 мл, что обычно соответствует 10 - 20 X исходной крови. Методика работы состоит в следующем. [2]
Для отделения белков от амфолитов-носителей и сахарозы существует ряд методов: а) гель-фильтрация на сефадексе или био-геле [123]; б) исчерпывающий диализ в течение нескольких суток против разбавленного солевого раствора. [3]
Для отделения белка от клеточной ткани в крупных предприятиях применяют луженые цилиндры с ситчатым дном, обтянутым частой шелковой газовой тканью и с мешалкой внутри. [4]
Из других методов отделения основных белков можно назвать обработку проназой, добавление NaC104 к буферу для депротеинизации, центрифугирование в градиенте плотности, колоночную хроматографию; однако пи один из них по простоте и эффективности не сравним с фильтрацией через мембранные фильтры. [5]
Особый случай представляет собой отделение белка от свободного детергента. Здесь следует помнить о том, что при концентрациях выше некоторых критических детергенты в водном растворе существуют в виде мицелл, достаточно крупных для того, чтобы не проникать в поры, например сефадекса G-25. Это означает, что отделить от детергентов гель-фильтрацией можно только очень крупные белки на крупнопористых матрицах. [6]
Разборка рибосомных частиц состоит в отделении белка от рРНК при повышении концентрации одновалентных ионов. Эти процессы также имеют многостадийный и кооперативный характер. Весьма интересна возможность обратной самосборки рибосомных частиц при надлежащем изменении среды. В основе самосборки лежит узнавание участка РНК молекулой определенного белка. [7]
Другой областью применения гель-хроматографии в биохимии является отделение белков от низкомолекулярных мешающих анализу примесей, например аминокислот, Сахаров, стероидов или реагентов, используемых для химической модификации белка. Методом гель-хроматографии чаще всего удаляют реагенты, предназначенные для введения в белок радиоактивной и флуоресцентной меток. Гель-хроматография позволяет также быстрее и эффективнее, чем диализ, осуществить обессолива-ние или смену буфера, требуемые в определенных схемах фракционирования, а также удаление кофакторов и ингибиторов, используемых при изучении кинетики ферментативных реакций. [8]
Результаты определения цинка в различных образцах ин-сулина после отделения белка трихлоруксусной кислотой получаются в ряде случаев пониженными по сравнению с результатами определения цинка в тех же образцах после сожжения с серной кислотой. [9]
Метод позволяет определять цинк в растворе инсулина после отделения белка трихлоруксусной кислотой, а также в остатке после сожжения инсулина в присутствии серной кислоты. [10]
Простейшим вариантом группового разделения с помощью ГПХ является отделение белков от низкомолекулярных примесей, в частности обессоливание. Для этих целей используются сильно сшитые гели, с низким пределом проницаемости. [11]
 |
Изучение седиментации методом ультрацеитрифугирования ( шлирен-оптика. [12] |
Однако этом случае время расслоения очень велико и, кроме того, отделение белка от полимеров, содержащихся в растворе, сопряжено с существенными трудностями. [13]
Утверждают, что этот метод является более удобным и быстрым, чем методы отделения белка с помощью пикриновой или сульфосалициловой кислоты. [14]
Сопоставление данных табл. 2 с данными табл. 1 показывает, что цинк, содержащийся в фильтрате после отделения белка, полностью определяется рассматриваемым методом, однако некоторая часть цинка содержится в осадке белка. [15]
Страницы: 1 2 3