Cтраница 3
Смесь фенола и воды имеет высокую диэлектрическую постоянную. На этом основан метод распределения белков и полисахаридов и ( или) нуклеиновых кислот между фенолом и водой. Отделению белков от полисахаридов и нуклеиновых кислот при экстракции смесью фенол - вода часто способствует и благоприятный коэффициент распределения, и способность этой смеси вызывать диссоциацию. [31]
Изучение белковых веществ связано с исключительными трудностями. Прежде всего они встречаются в природных условиях в виде очень сложных смесей как с неорганическими, так и органическими веществами. Уже отделение белков от неорганических соединений связано с большими трудностями, так как они прочно удерживают последние остатки минеральных солей. [32]
При выделении ферментов и других белков часто пользуются высаливанием при помощи сульфатов. Для дальнейшей очистки от солей раствор белка подвергают длительному диализу, что иногда приводит к денатурации. Очень удобным методом отделения белков от солей является фильтрация через декстрановый гель. [33]
При работе с одним и тем же раствором различные пары электродов всегда дают различные абсолютные потенциалы. Однако положение конечной точки титрования при этом совершенно не меняется. Есть все основания считать, что любой раствор, содержащий хлориды, может быть проанализирован с помощью описанного метода без предварительного разрушения органического вещества в растворе или отделения белка. Если в растворе присутствуют бромиды или иодиды, то они будут титроваться нитратом серебра раньше хлоридов и будут давать - отдельные точки в виде пиков. [34]
Изучение белковых веществ связано с исключительными трудностями. Прежде всего они встречаются в природных условиях в виде очень сложных смесей, как с неорганическими, так и органическими веществами. Уже отделение белков от неорганических соединений связано с большими трудностями, так как они прочно удерживают последние остатки минеральных солей. [35]
Суспензии, приготовленные из различных листьев, были похожи друг на друга и напоминали живые листья своим спектром, флуоресценцией, устойчивостью к свету, кислороду и угольной кислоте. Окончательная очистка производилась отделением окрашенного белка в высокоскоростной центрифуге ( 45 000 об / мин) и диализом через целлофанную мембрану в дестиллнрованную воду. [36]
Зависимость между обменной емкостью ионитов по ионам значительных размеров и внутримолекулярной пористостью ионитов использована в методе ионитовых сит, при помощи которого можно разделять ионы одного знака заряда, отличающиеся, однако, своими размерами. Этот метод прежде всего был использован для отделения ионов мета-лов от крупных ионов органических соединений, например, белков и других полиэлектролитов. Для этой цели были применены слабонабухающие катиониты, обладающие ничтожной набухаемостью. Они сорбируют значительное количество ионов металлов и практически не сорбируют белки и другие ионы высокомолекулярных соединений. Процесс отделения белков от ионов металлов сводится к фильтрованию раствора через ионит. Для полной деминерализации растворов полиэлектролитов в качестве ионитовых сит используют слабонабухающие сульфосмолы в Н - форме. Раствор полиэлектролита после такого рода фильтрования может быть нейтрализован анионитом в ОН-форме. [37]
Такие вещества, как, например, кровь, которые содержат белок или восстановители, не являющиеся сахарами, должны быть подвергнуты специальной обработке с целью отделения белка. Метод, применяемый для этого, должен приводить также к удалению восстановителей, не являющихся сахарами. При определении восстанавливающих Сахаров в крови этот метод состоит в следующем. Добавляют в пробирку промывные воды и равный объем 10-процентного раствора сульфата меди и перемешивают смесь. Пробирку для отделения белка наполняют дважды перегнанной водой точно до метки и с помощью магнитной мешалки с вибрирующей нитью тщательно перемешивают раствор. Затем раствор центрифугируют и осаждают белок, после чего берут для анализа аликвотную часть раствора, находящегося над осадком. Дальнейший анализ проводят по описанной выше методике. При вычислении содержания глюкозы в крови следует точно учесть степень разбавления раствора и объем аликвотной части. [38]
Окисление глюкозы или другого восстанавливающего сахара проводят нагреванием анализируемого раствора в течение 5 мин. После подкисления серной кислотой образующийся гексацианоферроат титруют раствором сульфата церия. Предварительно производят установку титра сульфата церия, пользуясь растворами - содержащими известные количества глюкозы. Как было показано различными авторами, существенное значение имеет правильный выбор реактивов, применяемых при отделении белка. В качестве метода отделения белка принят усовершенствованный [55] метод Сомогия [59], в котором в качестве основного реактива служит вольфрамат меди. Выбор этого метода обусловлен тем, что вольфрамат меди приводит к удалению большинства восстановителей, не являющихся сахарами, а также возможностью его использования при анализах в ультрамикромасштабе. [39]
Окисление глюкозы или другого восстанавливающего сахара проводят нагреванием анализируемого раствора в течение 5 мин. После подкисления серной кислотой образующийся гексацианоферроат титруют раствором сульфата церия. Предварительно производят установку титра сульфата церия, пользуясь растворами - содержащими известные количества глюкозы. Как было показано различными авторами, существенное значение имеет правильный выбор реактивов, применяемых при отделении белка. В качестве метода отделения белка принят усовершенствованный [55] метод Сомогия [59], в котором в качестве основного реактива служит вольфрамат меди. Выбор этого метода обусловлен тем, что вольфрамат меди приводит к удалению большинства восстановителей, не являющихся сахарами, а также возможностью его использования при анализах в ультрамикромасштабе. [40]
Объем образца исследуемой крови или другой жидкости должен составлять одну десятую или одну пятую часть объема пробирки. Образец помещают в пробирку, промывают сосуд, в котором содержался образец, первым раствором, после чего перемешивают раствор с образцом. С помощью пипетки добавляют при перемешивании второй раствор. Перемешивание осуществляют или с помощью вышеописанной мешалки с вибрирующей нитью, или же, еще проще, прикрепив трубку к какому-нибудь вибрирующему телу, например к вибратору обычного электрического звонка, который очень удобен в применении для этой цели. После того как в пробирку введен второй реактив и содержимое пробирки полностью перемешано, объем доводят до метки, еще раз перемешивают и отделяют осадок белка центрифугированием. Раствор, не содержащий белка, извлекают из пробирки с помощью капиллярной пипетки. Подробности проведения операции отделения белков применительно к каждому отдельному случаю указаны ниже при описании соответствующих методов анализа. [41]