Отделение - белок
Cтраница 2
В зависимости от этого содержание крахмала определяют одним из следующих методов: а) путем прямого измерения оптического вращения раствора после отделения белков [1, 2]; б) осахариванием крахмала под действием растительной ( из солода) или животной ( из слюны, из подчелюстной железы - панкреатической) а-амилазы [3, 4] и последующим определением восстанавливающих Сахаров или в) выделением крахмала в виде его комплекса с иодом. В последнем случае либо проводят титрование иода в комплексе [5, 6], либо комплекс разрушают и определяют содержание Сахаров, образующихся в результате кислотного [7] или ферментативного [8] гидролиза крахмала, содержащегося в комплексе. [16]
Такие вещества, как, например, кровь, которые содержат белок или восстановители, не являющиеся сахарами, должны быть подвергнуты специальной обработке с целью отделения белка. Метод, применяемый для этого, должен приводить также к удалению восстановителей, не являющихся сахарами. При определении восстанавливающих Сахаров в крови этот метод состоит в следующем. Добавляют в пробирку промывные воды и равный объем 10-процентного раствора сульфата меди и перемешивают смесь. Пробирку для отделения белка наполняют дважды перегнанной водой точно до метки и с помощью магнитной мешалки с вибрирующей нитью тщательно перемешивают раствор. Затем раствор центрифугируют и осаждают белок, после чего берут для анализа аликвотную часть раствора, находящегося над осадком. Дальнейший анализ проводят по описанной выше методике. При вычислении содержания глюкозы в крови следует точно учесть степень разбавления раствора и объем аликвотной части. [17]
Один из широкоиспользуемых методов получения препаратов ДНК, не содержащих белков, заключается в деструкции клеточных стенок или мембран с последующим применением анионного детергента типа додецилсульфата натрия и отделением белков в виде осадка, при сохранении нуклеиновой кислоты в растворе. Далее ДНК обычно выделяют осторожным добавлением этанола к солевому раствору нуклеиновой кислоты. [18]
Так как количество цинка в осадке белка не превышает 30 - 60 % от общего содержания цинка, то в большинстве случаев при контроле производства инсулина можно пользоваться для отделения белка трихлоруксусной кислотой. Представляется интересным вопрос о причинах попадания части цинка в осадок белка и о влиянии на биологическое действие инсулина как осаждаемого белком, так и остающегося в растворе цинка. [19]
За рубежом в качестве частного метода изолирования барбитуратов из крови предложен метод, основанный на обработке крови водой, подщелоченной едким натром, осаждении белков вольфраматом натрия и последующей экстракции ( после отделения белков) эфиром из кислых растворов. [20]
В сыворотке крови помимо белков содержатся небелковые азотсодержащие вещества: мочевина, креатинин, аминокислоты и др. Азот этих веществ называют остаточным азотом, так как он остается в фильтрате после осаждения и отделения белков. В крови здорового человека содержится 25 - 40мг % остаточного азота. Содержание остаточного азота в крови повышается при некоторых заболеваниях почек, что связано с неспособностью почек при этих заболеваниях выводить азотистые шлаки. В результате возникает уремия. [21]
К группе сложных белков, или протеидов, относятся такие белки, в состав которых, кроме белковой части, входит та или иная небелковая группа, прочно связанная с белком. Отделение белка от небелковой части достигается лишь после полного или частичного гидролиза протеидов. [22]
Для выделения таких биополимеров широко применяется фракционированное осаждение ( например, спиртом), позволяющее отделить некоторые гликопротеииы от белков. Для отделения белков используют также осаждение солями или экстракцию фенолом. Применение различных видов хроматографии ( иониты, сефадексы) позволяет получить достаточно чистые препараты углевод-белковых комплексов. [23]
Белки при растворении в воде образуют коллоидные растворы. Это дает возможность использовать метод диализа для отделения белка от посторонних низкомолекулярных примесей. [24]
 |
Разделение лизата ядер клеток зобной железы теленка на сефадек.| Выделение, ДНК из Bacillus subtilis на сефарозе 4В. [25] |
Синтезированным нуклеиновым кислотам сопутствуют белки. Разделить такую смесь довольно сложно, так как отделение белков не должно сопровождаться деполимеризацией нуклеиновых кислот. На рис. 6.14 показаны результаты выделения ДНК из ядер клеток зобной железы теленка [41], проведенного в среде 4М раствора гуанидингидрохлорида, который денатурирует и солюбилизирует белки, не вызывая деструкции высокомолекулярной ДНК. [26]
Если эти данные о соотношении составных частей гемоглобина сравнить с современными ( гематин - 4, глобин - 96 %) 42, то станет очевидным, что результаты Лаврова в большей степени приближались к действительным. Недостаточную точность данных можно объяснить лишь несовершенством методов отделения белка, о чем есть даже оговорка в работе Шульца. [27]
При групповом разделении смеси высокомолекулярные соединения не фракционируются. Гель-фильтрация в данном случае, подобно диализу, используется для отделения белков от низкомолекулярных примесей и может заменить его. [28]
Во втором варианте приборов камерного типа применяется забуференный раствор, так что в ходе процесса не возникает различий в значениях рН и белки либо движутся в разных направлениях, если рН раствора находится между изоэлектрическими точками белков, либо перемещаются в одном направлении с разными скоростями. Теорелл [300, 301] сконструировал несколько моделей таких приборов и успешно проводил в их отделение белков от примесей полисахарида [302]; однако он установил, что отделение одних белков от других осуществляется с большим трудом. [29]
Технология получения кормового или пищевого белка одноклеточных и многоклеточных микроорганизмов сравнительно несложная и заключается в наращивании по возможности наибольшего количества биомассы клеток, ее денуклеинизации, сепарировании и приготовлении целевого продукта. Культивирование того или иного микроорганизма проводят в оптимальных условиях ( до получения десятков-сотен граммов дрожжей в 1 л) в периодическом или непрерывном режиме, в стерильных или нестерильных условиях; денуклеинизацию клеточной биомассы можно проводить различными способами - экстракцией метанолом или щелочами, обработкой нуклеазами, температурным шоком для активизации эндонуклеаз ( в частности - РНКазы); отделением белка от нуклеиновых кислот из дезинтеграта клеток. [30]
Страницы: 1 2 3