Cтраница 2
Для его реализации необходим эталон определяемого вещества. Приготавливают растворы эталона различных концентраций, выбранных таким образом, чтобы они охватывали ожидаемый диапазон концентраций определяемого соединения. Снимают хроматограммы и строят график, подобный приведенному на рис. 6.4. Затем измеряют пик определяемого вещества и находят его концентрацию с помощью полученного графика. Разумеется, график может быть заменен соответствующим уравнением, параметры которого нетрудно найти известным способом. Этот метод требует строгой воспроизводимости объема образца, дозируемого в колонку. Чаще всего, при работе в среднем диапазоне масс определяемых соединений ( 0 1 - 10 мкг), явления необратимой сорбции или нелинейности детектора не осложняют работу, калибровочный график представляет собой прямую, проходящую через начало координат. Тогда допустимо снизить трудоемкость анализа, используя всего один калибровочный раствор, по концентрации определяемого вещества не слишком отличающийся от испытуемого. Для достижения максимальной точности калибровку необходимо проверять не реже, чем через каждые 4 - 5 ч работы. [16]
Получают дифференциальную хромато-грамму, вводя выбранный объем раствора 1 через отверстие для ввода пробы в хроматографическую колонку, поддерживаемую при соответствующей температуре, и элюируют при помощи газа-носителя. Повторяют определение еще два раза. Измеряют площадь пика, или, если фактор симметрии находится в пределах 0 95 - 1 05, измеряют высоту пиков определяемого вещества или веществ и внутреннего стандарта. Если пик примеси имеет то же время удерживания, что и пик внутреннего стандарта, то при оценке результатов делается допуск на взаимное влияние этих компонентов друг на друга. На основании полученных данных: рассчитывают содержание определяемых веществ. [17]
В методе внутреннего стандарта к анализируемому раствору добавляют известное количество стандарта. Стандарт должен давать пик, хорошо отделенный от пиков определяемого вещества и остальных компонентов пробы. После предварительного определения соотношения между откликами стандарта и определяемого вещества на хроматограмме анализируемого раствора измеряют соотношение площадей ( высот) пиков определяемого вещества и стандарта. Зная концентрацию стандарта, соотношение пиков и откликов стандарта и анализируемого компонента, вычисляют его концентрацию в растворе. Преимущество этого метода состоит в том, что в данном случае нет необходимости в точной дозировке пробы. [18]
Остановимся на количественном определении аминокислот в виде наиболее часто применяемых их летучих производных, а именно сложных эфирах N-ТФА - и алкилсилилпроизводных аминокислот. Для получения количественной информации при газохроматогра-фическом анализе аминокислот применяется метод внутреннего стандарта, основанный на добавлении к исследуемой смеси известного количества определенного вещества - внутреннего стандарта. На основании обработки хроматограмм ряда смесей с различным соотношением количеств внутреннего стандарта и определяемого компонента строят калибровочный график, выражающий зависимость отношения площадей пиков определяемого вещества и внутреннего стандарта от отношения их концентраций. При анализе многокомпонентных смесей с широким интервалом температур кипения иногда применяют несколько внутренних стандартов. [19]
При одних и тех же давлениях и температурах удерживаемый объем или время удерживания являются характеристикой вещества применительно к данной колонке. Неисправленный удерживаемый объем зависит от природы и количества неподвижной жидкой фазы; диаметра, длины и температуры колонки; природы, скорости и перепада давления газа-носителя и мертвого объема системы. Приведенный удерживаемый объем зависит от тех же самых переменных, кроме мертвого объема системы, который исключают из расчетов. Приведенным временем удерживания является время между выходом максимума пика несорбирующегося вещества, например элюента или газа-носителя, и выходом максимума пика определяемого вещества. Исправленным удерживаемым объемом называют приведенный объем, определенный с учетом перепада давления вдоль колонки [ ср. [20]