Поверхность - гель
Cтраница 1
Поверхность гелей промывают охлажденным электродным буфером и наносят по 10 - 50 мкг РНК в 0 02 - 0 05 мл электродного буфера, содержащего 10 % - ную сахарозу и 0 02 % - ный бромфеноловый синий. Для предотвращения денатурацион-ных изменений рибосомной РНК электрофорез проводят при 4 С. [1]
Поверхность геля покрывают стерильным кружком фильтровальной бумаги, по которому раскладывают ( по трафарету) 50 комочков почвы ( диаметром 1 - 2 мм) или наносят суспензию соответствующего разбавления. Чашки помещают во влажную камеру и ставят в термостат при температуре 28 - 30 С. [2]
Поверхность геля окиси хрома, примененного Хоу-ардом, неизвестна, но Б руна yep и Эммет [71] приготовили гель окиси хрома таким же методом и определили его поверхность по адсорбции азота. [3]
Чтобы поверхность геля была идеально гладкой, трубки по время - полимеризации нельзя сдвигать с места. После окончания реакции поду осторожно отсасывают с по-мощг. [4]
На поверхность геля в каждую трубочку пастеровской пипеткой наносят 2 капли сыворотки крови, разведенной в 20 раз, содержащей индикатор бромфеноловый синий. [5]
Если на поверхность геля внести смесь высоко - и низкомолекулярных соединений ( рис. 15, а) и пропускать растворитель через колонку, то маленькие частицы будут задерживаться и входить в поры геля. Дальнейшая элюация дает полное разделение компонентов ( рис. 15, а): маленькие частицы, имеющие более длинный путь через гель, задерживаются в нем, в то время как большие вымываются. При последующем элюировании частицы с меньшим молекулярным весом также вымываются из колонки. [6]
 |
Изотерма НИ6 УСреДНбННОЙ ТепЛОТЫ ЭДСОрбЦИИ В ДЗННОМ. [7] |
Однако определение поверхностей различных гелей, окислов, катализаторов не могло быть проведено по этому методу, так как оказалось, что у этих адсорбентов изотерма обычно имеет. [8]
Если над поверхностью геля продувать холодный воздух, то можно отвести до 0 1 вт / смг джоулева тепла. [9]
Это приписывается влажности поверхности геля. [10]
Для препаративного выделения зон с поверхности геля сначала срезают тонкий слой, в котором определяют положение компонентов. В соответствии с этим зоны вырезают из оставшейся части геля. Если заморозить и оттаять кусочки крахмального геля, последний приобретает губчатую структуру и жидкость из него можно просто выдавить или извлечь центрифугированием. Чтобы избежать возможной адсорбции на поверхности твердой фазы, рекомендуется производить эту операцию по возможности быстро. [11]
После окончания полимеризации буфер с поверхности геля отсасывают и наносят образцы РНК, полученные одним из описанных выше методов, в объеме 0 01 - 0 05 мл. Раствор РНК разводят электродным буфером до концентрации 2 мг / мл и добавляют равный объем 40 % - ного раствора сахарозы. В электродные камеры заливают трис-ацетатный буфер ( рН 7 8), разведенный в 3 раза. Для предотвращения денатурационных изменений РНК разделение рекомендуется проводить при 4 С. [12]
Затем ток отключают и на поверхность геля осторожно наносят образец. Для этой цели образец 32 Р - рРНК суспендируют в 1О - 1ОО мкл 10 % - ной сахарозы в растворе Д, содержащем О О2 % бромфено-лового синего. Наносить образец можно при помощи микропи - петки ( например, пипетки типа Lang-Levy), соединенной с дозатором. Тонкий конец пипетки вводят под буфер, к поверхности геля, и медленно выдавливают содержимое, получая на поверхности геля тонкий слой плотного раствора сахарозы. Снова включают ток и продолжают электрофорез при 5 мА до тех пор, пока бромфеноловый синий не дойдет до низа трубки. [13]
Затем в каждую трубочку на поверхность геля по стенке наслаивают пастеровской пипеткой дистиллированную воду ( не взмучивая гель), чтобы предупредить образование мениска на границе двух гелей. [14]
Для препаративного выделений зон с поверхности геля сначала срезают тонкий слой, в котором определяют положение компонентов. В соответствии с этим зоны вырезают из оставшейся части геля. Если заморозить и оттаять кусочки крахмального геля, последний приобретает губчатую структуру и жидкость из него можно просто выдавить или извлечь центрифугированием. Чтобы избежать возможной адсорбции на поверхности твердой фазы, рекомендуется производить эту операцию по возможности быстро. [15]
Страницы: 1 2 3 4