Cтраница 4
На техно-химических весах на часовом стекле взвесить бколо 0 3 г иода и поместить его в стакан, который поставить на асбестированную сетку на кольцо штатива. Стакан закрыть круглодонной колбой с холодной водой. Маленьким пламенем горелки осторожно нагревать стакан, чтобы пары иода не выходили наружу, а оседали на холодной поверхности колбы. Когда возгонка окончится, отставить горелку и после полного охлаждения снять колбу со стакана и обратить внимание на полученные кристаллы иода. Осторожно, сухой фильтровальной бумагой снять с колбы иод в чистый сухой бюкс с притертой крышкой. [46]
После того, как мениск установлен на черте, пикнометр вынимают, обтирают снаружи сухим чистым полотенцем и тщательно удаляют со стенок горлышка над мениском приставшие капельки рапы. Если пикнометр наполнен весьма концентрированным рассолом, удаление последних капелек с горлышка над мениском бывает сделать очень трудно, ибо такая рапа не смачивает фильтровальную бумагу и не впитывается ею. Влажная фильтровальная бумага хорошо впитывает такую рапу и позволяет полностью удалить приставшие капельки жидкости. Последнее вытирание производят уже сухой фильтровальной бумагой. [47]
На чистую сухую стеклянную пластинку размером 9X12 см отвешивают ( из бюкса по разности) 1 5 - 2 0 г вискозы, покрывают второй такой же пластинкой и для получения равномерного слоя раздавливают пальцами. Пластинки осторожно разъединяют ( перемещая одну пластинку по другой), а затем погружают вместе с пленками в раствор сульфата аммония концентрацией 300 г / л на 10 - 15 мин для коагуляции. После этого отставшие от стекла пленки осторожно переносят в 10 % - ный раствор серной кислоты и выдерживают в нем до тех пор, пока пленки не станут полностью прозрачными и бесцветными. Полученные пленки извлекают из кислоты и промывают в стакане холодной воды до нейтральной реакции по метилоранжу. Сушат пленки или в бюксе при температуре 105 до постоянного веса, или между листами сухой фильтровальной бумаги ( сначала отжимают фильтровальной бумагой) горячим утюгом в течение 5 - 7 мин. Для сушки может применяться также инфракрасная лампа. [48]
Для определения берут объем пробы с таким расчетом, чтобы в нем содержалось 50 - 2000 мг экстрагируемых веществ. На каждый литр пробы приливают 3 мл раствора сульфата алюминия и хорошо перемешивают. Снова перемешивают и осадку с выделенными маслами дают осесть на дно сосуда. Воду над осадком оифонируют, а осадок с остатком воды переносят в меньший сосуд, где опять раствору дают отстояться, после чего снова си-фонируют. Эфирные вытяжки соединяют, промывают три раза водой и оставляют стоять в течение очи с добавкой безводного сульфата натрия. Смесь фильтруют через сухую фильтровальную бумагу, собирая фильтрат во взвешенную колбу со шлифом емкостью примерно 100 мл. Остаток промывают на фильтре безводным петролейным эфиром. Содержащую экстракт колбу со шлифом присоединяют к холодильнику и отгоняют петролейный эфир на водяной бане. [49]
Нагревание ведите осторожно на маленьком пламени, чтобы пары иода не выходили наружу, а, охлаждаясь, оседали на колбе. После полного охлаждения поднимите колбу и осторожно кусочком сухой фильтровальной бумаги перенесите иод со дна колбы в приготовленный чистый бюкс с притертой крышкой. [50]
Для определения берут объем пробы с таким расчетом, чтобы в нем содержалось 50 - 2000 мг экстрагируемых веществ. На каждый литр пробы приливают 3 мл раствора сульфата алюминия и хорошо перемешивают. Затем на каждый литр смеси прибавляют 1 мл раствора карбоната натрия. Снова перемешивают и осадку с выделенными маслами дают собраться на дне сосуда. Воду над осадком сифонируют, а осадок с остатком воды переносят в меньший сосуд, где опять раствору дают отстояться, после чего воду снова сифонируют. Эфирные вытяжки соединяют, промывают три раза водой, добавив безводного сульфата натрия. Смесь фильтруют через сухую фильтровальную бумагу, собирая фильтрат во взвешенную колбу со шлифом емкостью примерно 100 мл. Остаток промывают на фильтре безводным петролейным эфиром. Содержащую экстракт колбу со шлифом присоединяют к холодильнику и отгоняют петролейный эфир на водяной бане. [51]
В коническую колбу вносят 2 - 3 г жира и добавляют 20 - 25 мл 25 % - ного спиртового раствора едкого кали. Колбу плотно закрывают пробкой с обратным холодильником, ставят на кипящую водяную баню и проводят омыление жира в течение 35 - 40 мин. К раствору мыла в колбе прибавляют 25 - - 30 мл горячей воды и перемешивают. Раствор перслипают п выпарительную чашку и нагревают на горячей водяной бане ( температура воды не выше 85 С) до полного исчезновения запаха спирта. К жидкости в чашке добавляют несколько миллилитров раствора серной кислоты ( 1: 3) до полного выделения слоя жирных кислот. Содержимое чашки осторожно переливают в делительную воронку. Отделяют водно-кислотный слой, а слой жирных кислот несколько раз промывают теплой водой до нейтральной реакции промьшных вод по метилоранжу. Промытый слой жирных кислот фильтруют через сухую фильтровальную бумагу в темную склянку с притертой пробкой и хранят в холодильнике. [52]
Для нанесения носителя на пластинки могут быть использованы описанные выше приборы, позволяющие получать слой разной толщины. Если суспензию носителя раскатывать стеклянной палочкой, на обоих концах которой наклеено несколько витков изоляционной ленты, также образуется достаточно ровный слой. Свежеприготовленные пластинки в течение 20 - 25 мин подсушивают на воздухе. Их можно-довольно долго хранить во влажной камере, если исключена возможность бактериального роста. При нисходящей тонкослойной гель-фильтрации пластинку располагают в камере под углом 10 - 15, Как правило, гель-фильтрацию проводят в водных растворах, поэтому хроматографическая камера может быть изготовлена из пластмассы. Она состоит из кюветы для буферного раствора, рамки, поддерживающей пластинку под соответствующим утлом, и крышки. Подача буферного раствора на пластинку осуществляется с помощью фитиля из фильтровальной бумаги. В качестве маркеров удобно использовать окрашенные высокомолекулярные вещества ( например, меченные флуоресцеином ферритин или v-глобулин), которые не задерживаются частицами геля. Гель-фильтрацию проводят до-тех пор, пока маркер не пройдет по крайней мере 10 см от линии старта. После этого пластинку извлекают из рамки и покрывают слой носителя листом фильтровальной бумаги ( например, Шляй-хер - Шуль 2043 или ватман 3 ММ), вырезанным по размеру пластинки. Некоторые исследователи рекомендуют применять в этом случае лист сухой фильтровальной бумаги. В нашей лаборатории используется смоченная и тщательно отжатая фильтровальная бумага, так как с ее помощью легче прикрыть слой носителя без образования под бумагой пузырьков воздуха. После этого бумагу снимают ( иногда вместе с частичками геля), высушивают при температуре около 120 С и окрашивают красителями, выявляющими белок, или реактивом Паули. Во время отмывания несвязавшегося красителя частички геля отделяются от бумаги, и после высушивания она может быть использована для документации. [53]