Полинуклео-тида

Cтраница 2

По методу Уайтфилда исследуемый препарат полинуклеотида обрабатывают фосфомоноэстера-зой для удаления концевых фосфатных групп. После такой обработки концевое углеводное кольцо с его zfuc - гидроксильными группами окисляется периодатом до диальдегидного производного. Полученное в результате соединение в щелочной среде разрушается с образованием свободного основания и полинуклеотида, содержащего на один нуклеотид меньше, чем исходный полинуклео-тид ( фиг. Этот процесс может быть повторен для удаления нового концевого нуклеотида, и так далее. [16]

Идеализированная схема секвени-рования ДНК в геле и определенная последовательность. [17]

На третьем этапе проводится электрофорез всех четырех проб в полиакрила-мидном геле. Для того чтобы условия разделения были идентичными во всех четырех пробах, пробы наносят на один гель и разделяют на четырех параллельных дорожках этого геля. Разделение, как уже говорилось в § 7.1, проходит по длине, и положение каждого фрагмента, детектируемое радиоавтографически, дает его длину, а тем самым и положение соответствующего мономера в исходной цепи. Таким образом, на одной дорожке, если речь идет о ДНК-фрагменте, определяется положение всех остатков тимидина, на другой - всех остатков дезокси-цитидина, на третьей - всех остатков дезоксигуанозина и на четвертой - всех остатков дезоксиаденозина. В сумме это дает положение в исходном полинуклео-тиде всех мономеров, а это и означает, что определяется его первичная структура. Эта структура в один прием считывается с геля, причем при достаточной длине дорожки геля одновременно может быть определено расположение сотен мономерных звеньев. [18]

Короткие тимидинполинуклеотиды, синтезированные химическим путем ( стр. Интенсивность матричной активности зависит от длины использованного полинуклеотида. Вполне измеримую активность можно обнаружить для тимидинового пентануклеотида; максимальная же активность достигается в присутствии тетраде-кануклеотида. Образующийся продукт представляет собой цепь из 50 - 100 нуклеотидов в среднем. Синтез поли-р Г происходит только в том случае, если используемый как матрица полинуклео-тид содержит более восьми дЦ - нуклеотидов. [19]

Страницы: 1 2