Полоса - преципитация
Cтраница 2
При достаточно высокой концентрации реагентов полоса преципитации достигает соседнего сектора агаровой пластинки, в котором аналогично формируются полосы преципитации с участием другой антигенной системы. Характер взаимодействия полос преципитации двух сравниваемых систем различен, и как показал Оухтер-лони, определяется степенью сходства антигенов. На основании сравнительного анализа антигенов в РДП в агаровом геле выделяют три вида реакции. Реакция идентичности - полосы преципитации, образованные АГ и AT, плавно сливаются, что указывает на серологическое тождество сравниваемых антигенов. Реакция неидентичности - полосы преципитации, образованные антигенами и антисывороткой к ним, перекрещиваются, что свидетельствует о серологическом различии сравниваемых антигенов. Реакция частичной идентичности - полосы преципитации, образованные антигенами и анти-сывороткой к ним, сливаются, но полоса преципитации, образованная одной из этих систем АГ - - AT, дает отросток - шпору, являющийся непосредственным продолжением одной из полос преципитации. Этот тип реакции рассматривают как случай частичной идентичности антигенов, указывающий на то, что в одной из систем АП несет на себе два различных типа детерминантов, а АГ2, присутствующий в другой системе, имеет детерминанты только одной специфичности. [16]
Иммуноглобулины разных классов имеют много общих антигенных детерминант, но различаются по электрофоретической подвижности, поэтому они образуют при иммуноэлектрофорезе вытянутую асимметричную полосу преципитации. Особое значение этому явлению придается при диагностике так называемых моно-клональных иммуноглобулинопатий. При этих заболеваниях ( например, множественном миеломатозе или макроглобулинемии Вальденштрема) клон злокачественно пролиферирующих плазматических клеток обычно продуцирует гомогенный монокло-нальный иммуноглобулин. Патологическое увеличение популяции молекул этого иммуноглобулина приводит к тому, что при иммуноэлектрофорезе можно наблюдать характерную симметричную полосу преципитации. IgA - и IgG-типа, можно заметить также, что при значительном увеличении концентрации отдельных белков при моноклинальных иммуноглобулинопатиях происходит растворение полос преципитации в избытке антигена. Это явление может стать причиной неверного толкования иммуно-электрофореграмм, поскольку растворение преципитата воспринимается как отсутствие данной белковой фракции, хотя на самом деле она присутствует в большом избытке. В этих случаях следует устранять избыток антигена 5 - 10-кратным разбавлением исследуемой сыворотки с высокой концентрацией белка. [17]
Раствор белкового антигена Г и специфическая иммунная сыворотка, диффундируя навстречу друг другу на ацетат-целлюлозной мембране, в месте встречи образуют полосы преципитаций. [18]
При использовании антисыворотки с высоким титром уже через несколько часов после постановки реакции в промежуточном слое агара появляется одна или несколько полос преципитации. Если используемая антисыворотка имеет низкий титр антител или применяется в большом разведении, то образование полос преципитации происходит через несколько дней. [19]
Для успешного анализа белковых растворов неизвестного состава можно применять следующие методы: 1) иммуноэлектрофорез в тех случаях, когда удается идентифицировать полосы преципитации, полученные с иммунной сывороткой ( фиг. 31А); 2) метод Оссермана в тех случаях, когда исследователь располагает растворами референс-белка и соответствующей антисывороткой ( фиг. [20]
Положение полос преципитации можно охарактеризовать величиной р, которая выражает в процентах отношение расстояния между нижней границей агарового слоя, содержащего антиген, и полосой преципитации ко всей длине промежуточного слоя агара, который первоначально не содержал ни антигена, ни антител. [21]
Внесенные образцы диффундируют в геле равномерно по всем направлениям, и в тех участках геля между лунками, где возникает оптимальное соотношение концентраций антигена и антител, образуется полоса преципитации. [22]
В процессе диффузии АГ и AT в зону нейтральногс агара в последнем образуется преципитат в виде дискретных полос, соответствующих отдельным система. Полосы преципитации остаются неподвижны ми, если АГ и AT взяты в оптимальных соотношениям при которых оба реагента полностью включаются в преципитат. Если один из компонентов находится в избытке, то полоса преципитации перемещается в направлении от него. При оптимальном соотношении АГ и AT формирующаяся линия преципитации выражена наиболее четко и со временем лишь увеличивается в ширине. При отклонении их соотношения от оптимального линия преципитации не только смещается, но и приобретает диффузный характер. Если разница в концентрации АГ и AT в системе очень велика, то преципитат образуется не в центральном слое, а в слое реагента, представленного в меньшей концентрации. [23]
Для длительного хранения препараты, после их промывания, высушивают при комнатной температуре. Полосы преципитации на высушенном препарате еле заметны, однако после смачивания его в дистиллированной воде они проявляются и видны не хуже, чем на натив-ных препаратах. [24]
При достаточно высокой концентрации реагентов полоса преципитации достигает соседнего сектора агаровой пластинки, в котором аналогично формируются полосы преципитации с участием другой антигенной системы. Характер взаимодействия полос преципитации двух сравниваемых систем различен, и как показал Оухтер-лони, определяется степенью сходства антигенов. На основании сравнительного анализа антигенов в РДП в агаровом геле выделяют три вида реакции. Реакция идентичности - полосы преципитации, образованные АГ и AT, плавно сливаются, что указывает на серологическое тождество сравниваемых антигенов. Реакция неидентичности - полосы преципитации, образованные антигенами и антисывороткой к ним, перекрещиваются, что свидетельствует о серологическом различии сравниваемых антигенов. Реакция частичной идентичности - полосы преципитации, образованные антигенами и анти-сывороткой к ним, сливаются, но полоса преципитации, образованная одной из этих систем АГ - - AT, дает отросток - шпору, являющийся непосредственным продолжением одной из полос преципитации. Этот тип реакции рассматривают как случай частичной идентичности антигенов, указывающий на то, что в одной из систем АП несет на себе два различных типа детерминантов, а АГ2, присутствующий в другой системе, имеет детерминанты только одной специфичности. [25]
После образования полос преципитации поверхность агарового геля промывают дистиллированной водой и помещают препарат, подобно негативной фотопластинке, в фотоувеличитель. Далее поступают точно так же, как при обычной фотопечати. При помощи объектива фотоувеличителя полосы преципитации фокусируют на светочувствительной бумаге. Рекомендуется печатать на контрастной фотобумаге и использовать контрастный проявитель. [26]
После образования полос преципитации производят элюирование из агарового геля тех белков, которые не участвовали в реакции преципитации. Для этого агаровую пластинку заливаютО 9 % - ным раствором NaCl и проводят элюирование в течение 48 ч, 2 - 3 раза в день меняя элюирующую жидкость. [27]
Метод одномерной диффузии в агаре удобен главным образом для качественного анализа. По числу образующихся полос преципитации можно судить о минимальном числе разных антигенных компонентов, которые реагируют с антителами соответствующей специфичности в данной системе. [28]
 |
Иммуноэлектрофорез в геле ( анализ белковых антигенов цельной сыворотки человека. [29] |
При наличии в растворе нескольких АГ, диффундирующих независимо друг от друга, количество полос соответствует количеству АГ. Серологически родственные АГ образуют полосы преципитации, сливающиеся друг с другом, полосы же разнородных АГ перекрещиваются. Это позволяет определить общность антигенной структуры различных исследуемых объектов. [30]
Страницы: 1 2 3 4