Полоса - преципитация
Cтраница 4
Белки-антигены сначала разделяются гель-электрофоретически. При встрече с диффундированными внутрь геля антителами происходит образование комплексов антиген - антитело, наблюдаемых в виде серповидных полос преципитации. [47]
Сначала исследуемый антиген ( например, сывороточный альбумин человека) обычным путем подвергают электрофорезу. Затем заполняют канавку для антисыворотки соответствующей иммунной сывороткой ( например, кроличьей антисывороткой к сывороточному альбумину человека) и оставляют для диффузии и образования полос преципитации. [48]
По окончании инкубации мембрану извлекают из масла и через некоторое время, когда стечет его избыток, быстро проводят через эфир. После этого мембрану на 1 - 5 ч помещают в физиологический раствор хлористого натрия для удаления растворимых белков, не участвовавших в реакции преципитации; затем ее извлекают, промокают фильтровальной бумагой и окрашивают для выявления полос преципитации, как описано на стр. [49]
Этот метод весьма полезен, например, при диагностике недостаточности синтеза иммуноглобулинов какого-либо класса. В этом случае электрофоретическому разделению подвергают нормальную сыворотку человека, в зону абсорбирующих антигенов вносят сыворотку больного, а в зону иммунной сыворотки - антисыворотку к сывороточным белкам человека. В образовании полос преципитации с фракциями нормальной сыворотки человека принимают участие только те антиглобулиновые антитела, которые не встретили соответствующих им иммуноглобулинов в сыворотке больного, диффундируя из зоны антисыворотки в зону нормальной сыворотки. [50]
В сущности все методы иммунодиффузии основаны на явлении, которое наблюдал Бекхольд: взаимодействии антиген - антитело в геле. Растворимый белковый антиген и иммунная сыворотка диффундируют в геле навстречу друг другу. В месте встречи обоих реагентов возникает полоса преципитации, которую можно легко наблюдать и регистрировать. [51]
Всю поверхность пластинки заливают слоем расплавленного 1 % - ного агара толщиной 1 мм. После его затвердения между зонами исследуемого образца и контрольных соединений вырезают продольную канавку, которую заполняют специфической иммунной сывороткой. Пластинку помещают во влажную камеру и образовавшиеся полосы преципитации фотографируют в на-тивном состоялии или после окрашивания ( фиг. [52]
Например, если требуется определить в смеси белков липопротеиды, полученную иммуноэлектро-фореграмму окрашивают красителями, специфически выявляющими липиды. В этом случае должны окраситься только те полосы преципитации, которые содержат липопротеиды. [53]
Страницы: 1 2 3 4