Полоса - преципитация
Cтраница 3
Форма полос преципитации позволяет судить о гомогенности или гетерогенности исследуемых белков. Гетерогенная популяция молекул обычно дает вытянутую асимметричную полосу преципитации. [31]
Их следует ежедневно просматривать, отмечая появление полос преципитации. В зависимости от условий опыта срок наблюдения может ограничиться сутками или же продлиться несколько дней, а то и недель. [32]
Через определенный промежуток времени антиген диффундирует в агар. В условиях относительного избытка антигена в агаре образуется полоса преципитации, которая медленно мигрирует от границы, разделяющей агар и раствор антигена, в нижние слои агара. С увеличением концентрации антигена происходит не только продвижение фронта преципитации вниз, но также и растворение преципитата у верхнего края полосы. [33]
Если молекулярный вес антигена меньше молекулярного веса антител, то полоса преципитации изгибается в сторону лунки, заполненной иммунной сывороткой. Если же молекулярный вес антигена больше молекулярного веса антител, то полоса преципитации сдвигается и изгибается в сторону лунки, заполненной антигеном. [34]
Реакцию проводят в агаровых пластинках с параллельными лунками, в которые вносят АГ, а в противоположные лунки - AT. Диффундируя из них навстречу друг другу, они взаимодействуют и образуют полосы преципитации. Поскольку реагенты диффундируют из лунок концентрически, появляется возможность провести сразу несколько реакций, разместив вокруг лунки с AT несколько лунок с разными антигенными растворами. И, наоборот, заполняя периферические лунки AT, а центральную АГ, можно исследовать набор антител в сыворотках разного происхождения. [35]
Ранее описанные методы окрашивания белков и липопротеидов вполне пригодны для окрашивания полос преципитации при иммуноэлектрофорезе. Ниже приведено несколько методов специфического окрашивания, которые позволяют идентифицировать определенные белковые фракции. [36]
Предварительный анализ исследуемых образцов можно легко и быстро провести в слое агара на стеклянной пластинке, разместив лунки на расстоянии 3 - 5 мм одна от другой в два параллельных ряда. Благодаря небольшому расстоянию между лунками, заполненными антигеном и иммунной сывороткой, полосы преципитации должны появляться весьма быстро. [37]
Далеко не всегда образуется одна-единственная полоса или зона преципитации, часто их несколько. Ясно видно, что в зоне между антисывороткой и антигеном II имеется несколько полос преципитации. I, напротив, представляет собой высокоочищенную фракцию, содержащую, по-видимому, один-единственный компонент. [39]
Увеличение температуры в указанных пределах ускоряет диффузию и появление полос преципитата. Колебания температуры в процессе опыта ведут к образованию артефактов, то есть появлению неспецифических полос преципитации, которые отличаются от специфических своей неподвижностью. Реакция развивается в течение 3 - 14 дней. Диффундируя в агар, антигены при достижении пороговой концентрации формируют в реакции со специфическими AT дискретные полосы преципитации. Они начинают появляться обычно на 1 - 3 день опыта. В результате непрерывного проникновения в агар новых порций АГ полосы преципитации смещаются ко дну пробирки вследствие растворения преципитата в избытке АГ и наращивания полосы по фронту миграции за счет реакции АГ с новыми порциями AT. Скорость миграции полос, образованных разными АГ, неодинакова. Она зависит от скорости диффузии АГ и концентрации АГ и AT в каждой данной системе. Скорость движения полос преципитации в агаре зависит также от температурных условий, концентрации агара и может изменяться от присутствия в реагирующей системе других веществ в высокой концентрации. [40]
Растворимый антиген диффундирует в агаровом геле, содержащем иммунную сыворотку. В том участке геля, где возникает его относительный избыток, в агаре образуется полоса преципитации. [41]
В месте встречи компонентов этой системы, которые диффундируют в агаровом геле, образуются полосы преципитации. [42]
Если после иммуноэлектрофореза исследуемой смеси белков в одну из параллельных канавок агаровой пластинки ввести раствор известного белка, а в другую - специфическую антисыворотку к этому белку, то в месте встречи диффундирующих антигенов и антител образуется продольная полоса преципитации. Если исследуемая смесь белков содержит компонент, идентичный известному белку, то соответствующая этому компоненту полоса преципитации по краям сольется с продольной полосой, демонстрируя феномен идентичности по Ухтерлони ( см. стр. [43]
Исследуемый антиген подвергают электрофорезу на ацетат-целллюлозной мембране. После этого на мембрану наносят специфическую иммунную сыворотку, и в результате ее диффузии образуются полосы преципитации, выявляемые при окрашивании. [44]
При использовании антисыворотки с высоким титром уже через несколько часов после постановки реакции в промежуточном слое агара появляется одна или несколько полос преципитации. Если используемая антисыворотка имеет низкий титр антител или применяется в большом разведении, то образование полос преципитации происходит через несколько дней. [45]
Страницы: 1 2 3 4