Cтраница 1
![]() |
Схема расположения кодирующих и неколирующих нуклеотидных последовательностей вдоль цепи РНК фага MS2. [1] |
Кодирующая последовательность мРНК также фланкирована, как с 5 -конца, так и с З - конца, некодирующими последовательностями. Уже отмечалось, что 5 -конец обычно модифицирован кэпом ( см. рис. 5), имеющим, по-видимому, значение для первичной ( преинициаторной) ассоциации мРНК с рибосомой. [2]
Кодирующая последовательность прохимозина А, которая была введена в плаз-миду pBR322, вначале была синтезирована химическим путем, причем было показано, что она идентична естественному гену теленка. [3]
Внесение специфических изменений в кодирующие последовательности ДНК, приводящих к определенным изменениям в аминокислотных последовательностях, называется направленным мутагенезом. Однако для большинства белков такие данные отсутствуют, поэтому направленный мутагенез - это в значительной мере эмпирическая процедура, основанная на методе проб и ошибок. Каждый белок, кодируемый мутантным геном, нужно протестировать и убедиться в том, что мутация дала желаемый эффект. [4]
Результаты такой ошибки более серьезны: вся последующая кодирующая последовательность триплетов мРНК окажется не в фазе, так что синтезируемая полипептидная цепь не будет иметь ничего общего с нормальным продуктом. [5]
Одна полинуклеотидная цепь мРНК не обязательно содержит только одну кодирующую последовательность. Для прокариотических мРНК очень обычно, что одна полинуклеотидная цепь включает кодирующие последовательности для нескольких белков. Такие мРНК получили название полицистронных мРНК ( происходит от термина цистрон, введенного С. Различные кодирующие последовательности ( цистроны) в пределах одной цепи мРНК обычно разделены некодирующими последовательностями. Такая внутренняя некодирующая последовательность начинается после терминаторного кодона предшествующего цистро-на; иногда в ее начале - имеется еще один терминаторный кодон, по-видимому, дублирующий терминаторный кодон цистрона на случай почему-либо не состоявшейся терминации. [6]
![]() |
Отбор гибридов. Гибридизацией с ДНК геномного клона отлавливают кДНК - клон, амплифицируют его, клонируют и тестируют. [7] |
Положительная перекрестная гибридизация означает, что данный клон с большой вероятностью содержит кодирующие последовательности, поскольку многие экзоны в ходе эволюции не изменялись, в то время как повторяющиеся и некодирующие последовательности ДНК, в том числе и интроны, претерпели существенные изменения. Положительный зооблот означает, что клон содержит экзон ( ы), однако не показывает, есть ли в нем ген искомого заболевания. [8]
Физическая длина цепи мРНК, по-видимому, никогда не равна длине ее кодирующей последовательности. Во-первых, первому кодону всегда предшествует более или менее протяженная некодирующая 5 -концевая последовательность. Во-вторых, терминирующий кодон никогда не заканчивает цепь мРНК, а за ним всегда следует некодирующая 3 -концевая последовательность. В дополнение к этому, эукариотические мРНК часто ( но не всегда) продолжаются в длинную некодирующую 3 -концевую полиадениловую последовательность, которая добавляется к мРНК специальным ферментом ( полиаденилатполимеразой) после завершения транскрипции. [9]
После этого рибосома может повторить цикл с другой цепью мРНК или другой кодирующей последовательностью той же цепи. [10]
Гибридный белок, химерный белок ( Fusion protein) Продукт клонированных совместно двух или более кодирующих последовательностей из разных генов. Представляет собой одну полипептидную цепь. [11]
Регуляция на уровне трансляции у прокариот практически целиком сводится к разрешению или предотвращению инициации трансляции данных кодирующих последовательностей мРНК рибосомами; именно этим путем достигается избирательная или преимущественная трансляция одних мРНК или отдельных ее цистронов и выключение трансляции других. Кроме того, разная скорость инициации на разных мРНК или их цистронах определяет соотношение продукции соответствующих белков. [12]
Надо сказать, что вне фазы ( рамки) считывания триплеты UAA, UAG и UGA в пределах кодирующей последовательности мРНК встречаются существенно чаще, чем в фазе считывания, где имеется, как правило, всего один терминирующий кодон на всю кодирующую последовательность. Поэтому обычно случайный сдвиг рамки в процессе элонгации не может привести к синтезу очень длинного неправильного полипептида и чаще всего приводит к скорой терминации этой неправильной трансляции. В некодирующих участках мРНК, включая межцистронные участки поли-цистронных РНК, частота терминирующих триплетов обычно также высока. [13]
В связи со сказанным, существует специальный, довольно сложный механизм инициации трансляции, обеспечивающий как точное узнавание начала кодирующей последовательности и ее дальнейшую фазировку, так и возможность положительных и отрицательных регуляторных влияний. [14]
Чего ожидали меньше всего, так это каких-то неожиданностей в самих генах, то есть в участках ДНК, кодирующих последовательности аминокислот в белках. Ведь код, казалось, был твердо установлен, было четко известно, что каждому белку отвечает свой определенный участок ДНК, который, собственно, и есть ген. Короче, все опять свято верили в незыблемость основной догмы молекулярной биологии. От шока, вызванного открытием ревертазы, к середине 70 - х годов уже оправились. И вдруг оказалось, что у него на одном и том же участке ДНК записана информация о двух белках. [15]