Питательный агар

Cтраница 2

Для этого наносят на поверхность чашек Петри с питательным агаром культуру чувствительных к фагу бактерий, которую выдерживают при оптимальной температуре в течение нескольких часов. В период указанного времени увеличивается численность популяции и образуются микроколонии. На половине чашек клоны затем перераспределяют на поверхности питательного агара шпателем после добавления 0 1 мл физиологического раствора. После этого все чашки Петри засевают специфическим фагом и выдерживают их в термостате. В итоге подсчитывают число колоний, развившихся из выживших устойчивых клеток. В случае прямой адаптации бактерий к фагу число устойчивых колоний на контрольных чашках всегда будет соответствовать числу их в чашках, где бактерии были перераспределены, так как перераспределение не изменяет числа бактерий на чашках. [16]

Исследуемую колонию засевают петлей на сектор чашки с питательным агаром. Стерильным пинцетом захватывают кусочки фотопленки и вводят перпендикулярно поверхности в агар в зоне посева. Чашки помещают в термостат при температуре 37 С, Результаты учитывают через 6 - 8 ч и позднее. Результат положительный, если просветляется нижний участок пленки, погруженный в агар с растущей культурой, образующей желатиназу. [17]

Артемова предложила выращивать посевы на мембранных фильтрах на стандартном питательном агаре, что исключает угнетающее влияние ТТХ, а для облегчения подсчета выросших колоний использовать реактив для определения оксидазноп активности. [18]

Широкому применению метода учета числа сапрофи-тов поверхностным посевом на питательный агар мешают трудности, возникающие при нанесении пробы более 0 1 мл. Этот недостаток Clark ( 1971) рекомендует устранять путем предварительного подсушивания чашек в течение 2 - 14 ч в перевернутом состоянии при 24 - 50 С. Агар теряет 3 - 4 части воды из объема 15 мл и хорошо впитывает нанесенную воду. [19]

К 100 мл расплавленного и охлажденного до 50 С питательного агара добавляют 5 - 10 % дефибрированной крови и 1 мл 2 % - го раствора теллурита калия. Среду тщательно перемешивают и разливают в стерильные чашки Петри. [20]

В практике наиболее распространен учет группы микроорганизмов, образующих колонии на питательном агаре при определенной температуре и времени инкубации в аэробных и факультативно анаэробных условиях. Сравнимые данные можно получить только при строгом соблюдении всех параметров метода, которые оговаривают для каждого объекта, особенно при нормировании показателя. [21]

Дистиллированной воды 600 мл, желчи крупного рогатого скота 400 мл, сухого питательного агара Дагестанского НИИ питательных сред 35 - 40 г, калия фосфата двуосновного 5 г, калия фосфата одноосновного 5 г, натрия аммония фосфата 5 г. Расплавить при нагревании, установить рН 7 2 - 7 4, разлить количественно в сосуды, простерилизовать 20 мин при 121 С. Перед употреблением в расплавленный и слегка охлажденный агар добавить из расчета на 100 мл среды: глюкозы 0 5 г, 1 % водного раствора ТТХ 1 мл, 1 % водного раствора метиленового синего ( хранить не более 14 дней) 0 6 мл, полимиксина 20000 ЕД, 0 1 % спиртового раствора фурацилина 1 2 мл. Тщательно смешать, разлить в чашки толстым слоем по 20 - 25 мл. [22]

Чувствительность к полимиксину определяют путем посева выделенной культуры на чашки Петри с питательным агаром, содержащим 50 ЕД полимиксина М или В в 1 мл питательной среды. Вибрионы Эль-Тор не чувствительны к антибиотику и хорошо растут на чашках, в отличие от классических холерных вибрионов. [23]

При определении чувствительности методом диффузии в агар чистую культуру возбудителя засевают газоном на питательный агар в чашке, например, тампоном, смоченном в стандартизованной ( 10s КОЕ / мл) суспензии микроорганизма. Затем на поверхность агара укладывают стандартные бумажные диски, пропитанные антибиотиками, которые диффундируют в агар, создавая градиент концентрации. На чашку диаметром 90 мм равномерно укладывают не более шести дисков с определенным количеством антибиотика. После инкубирования в термостате измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков и по специальным таблицам определяют степень чувствительности к тому или иному антибиотику ( см. цв. Поскольку опыт диффузии ставят в стандартных условиях ( состав и количество среды, количество засеваемых микробов, температура и сроки инкубирования, стандартные диски и др.), каждому значению диаметра зоны вокруг диска с антибиотиком соответствует определенное значение МИК. К категории S ( от англ, sensitive, чувствительный) относят те, для которых использование средних терапевтических доз будет достаточным для трехкратного превышения МИК. В категорию / ( от англ, intermediate, промежуточный) относят те микробы, для подавления которых потребуются максимальные терапевтические дозы. [24]

Оценка качественного состава сапрофитной микрофлоры может быть дана и при посеве на поверхность питательного агара в количестве 0 1 мл испытуемой воды или соответствующего разведения с последующим растиранием шпателем. В этом случае ТТХ или реактив для ок-сидязного теста накапывают на выросшие колонии на всю поверхность чашки или на секторы при густом посеве. [25]

Оценка качественного состава сапрофитной микрофлоры может быть дана и при посеве на поверхность питательного агара в количестве 0 1 мл испытуемой воды или соответствующего разведения с последующим растиранием шпателем. В этом случае ТТХ или реактив для ок-сидазного теста накапывают на выросшие колонии на всю поверхность чашки или на секторы при густом посеве. [26]

Посев заливкой.| Посев уколом. [27]

Если засеваемая культура находится внутри или на поверхности твердого субстрата, например почвы или питательного агара, то можно также использовать проволочную петлю для посева в жидкую среду. Для успешного переноса достаточно потереть петлю о внутреннюю поверхность сосуда с питательной средой. [28]

Если в качестве вектора служит плазмида pBR322, то для отбора бактерий-трансформантоа используют добавление в питательный агар антибиотика - ампициллина или тетрациклина, в зависимости от того, какой из генов, Ыа или tet, остался интактиым после аведения чужеродной ДНК. На такой среде клоны образуют только клетки с плазмидами. Для отделения рекомбинантных бактерий часть материала каждого клона переносится на другую чашку Петри, содержащую антибиотик, ген устойчивости к которому был разрушен при создании рекомбинантоа. На этой чашке Петри дают клоны только те бактерии, которые содержат исходную плазмиду pBR322, а рекомбинантные бактерии клоны не образуют. После такой идентификации рекомбинантные клоны могут применяться для дальнейшего анализа. Отбор по определенному биологическому признаку, в частности по устойчивости к антибиотику, называется селекцией. [29]

Подсчитывают на 2 - х чашках число выросших колоний ( на поверхности и в глубине питательного агара) и рассчитывают среднее арифметическое значение. Для выявления плесневых и дрожжевых грибов исследуемую воду засевают по 0 5 мл на среду Сабуро и инкубируют при комнатной температуре в течение 3 - - 4 сут. Подсчитывают число выросших колоний и также рассчитывают среднее арифметическое. [30]

Страницы: 1 2 3 4