Агароза

Cтраница 2

Гель агарозы промывают 2 М фосфатным буфером и отфильтровывают при отсасывании. [16]

Гель агарозы подсушивают, отсасывая на воронке со стеклянным фильтром в течение 5 мин, и взвешивают. [17]

Спектры солюбилизированной агарозы. [18]

Гели агарозы могут быть растворены в горячей воде, немодифицированная агароза растворяется при 60 С. При последующем охлаждении высококонцентрированных водных растворов агарозы получаются непрозрачные растворы, в то время как более разбавленные растворы становятся вязкими, но остаются прозрачными. [19]

Гели агарозы с присоединенными ферментами освобождают от буфера промыванием на стеклянном фильтре ( № 3) дистиллированной водой, водно-ацетоновой смесью, содержание ацетона ь которой постепенно увеличивается. Проводят кислотный гидролиз ( 6 М соляная кислота) навески модифицированного геля при 110 С в течение 24 ч в закрытом эвакуированном сосуде. Аминокислотный анализ гидролизата проводят на аминокислотном анализаторе и содержание белка рассчитывают по содержанию аспарагиновой и глутаминовой кислот, аланина и лейцина. При высоком содержании углеводов гидролизах темнеет, однако это не мешает анализу. [20]

Гели агарозы выпускаются в виде водных суспензий с добавкой 0 02 % азида натрия в качестве консервирующего агента. [21]

Взвешивают агарозу ( 250 мг) и добавляют к ней 25 мл электродного буфера. Суспензию нагревают на кипящей водяной бане до получения прозрачного раствора, не содержащего пузырьков воздуха. Охлаждают агарозу до 40 С и осторожно заливают в предварительно прогретую кассету прибора для электрофореза ( с. Оставляют при комнатной температуре на 1 - 2 ч для полимеризации. [22]

Влажную ацетилированную агарозу помещают в коническую колбу с 80 мл 1 М раствора КОН в абсолютном спирте. Колбу закрывают и оставляют в темноте при комнатной температуре на 21 час, встряхивая время от времени. Содержимое колбы затем нейтрализуют по фенолфталеину разбавленной уксусной кислотой. Фенолфталеин следует прибавлять к аликвотной пробе, а не ко всей массе, так как агарозу трудно отмыть от него. Агарозу отделяют фильтрованием, промывают абсолютным спиртом и эфиром ( стр. [23]

Разделение ДДСН-бедковых комплексов и стабильность капилляра при замене декстранового. [24]

Слева - регулярная агароза, справа - гидрокси-этилагароза. [25]

Вначале суспензии агарозы с иммобилизованным ферментом промывают 0 1 М Na-фосфатным буфером, рН 7 4, затем небольшим объемом 8 М мочевины, после чего добавляют двойной объем раствора мочевины и оставляют на 1 ч при комнатной температуре ( или на ночь при 4 С), используя для перемешивания магнитную мешалку. Удаляют раствор мочевины и вновь промывают сначала небольшим объемом 8 М мочевины, а затем указанным выше буфером. Отсутствие мочевины в пробах контролируют с помощью реактива Несслера. Белок в суспензии определяют описанным выше способом. Снижение концентрации белка в суспензии вызвано диссоциацией субъединиц фермента, не образовавших ковалентных связей с группами носителя. [26]

К суспензии агарозы, количество которой эквивалентно 1 г сухого веса носителя, добавляют 1 мл раствора альдолазы, содержащего фермент в концентрации 1 мг / мл. Предварительно альдолазу обессоливают на колонке с сефадексом G-50 в указанном буфере, содержащем 5 мМ ЭДТА. Инкубацию проводят 10 мин при комнатной температуре и постоянном осторожном перемешивании на магнитной мешалке. Добавляют глицин до конечной концентрации 70 мМ и инкубируют смесь в течение 2 ч при комнатной температуре и перемешивании. Агарозу промывают указанным буфером с ЭДТА до полного исчезновения в элюате глицина и белка. Отсутствие глицина контролируют по реакции с нингидрином ( с. Белок определяют по поглощению при 280 нм. [27]

Главными производителями агарозы являются фирм-а Pharmacia ( Швеция), выпускающая ее под названием сефароза, и Bio-Rad Labs. [28]

Стабильность матрицы агарозы можно значительно повысить путем сшивания эп-ихлоргидрином [34, 56], 2 3-дибромпропанолом [34, 36] или дивинилсульфоном [34, 58] перед активацией бром-цианом. Устойчивость в водной среде как в кислой, так и в щелочной областях ( рН 3 - 14) растет с увеличением числа сшивок. Возможность использования хаотропных солей, главным образом для элюирования антител, обсуждается в разд. [29]

Таким образом, агароза, как предполагают, представляет собой линейную регулярную молекулу, построенную из остатков галактозы, связанных попеременно 0 - 1 - - 4 - и а-1 - - 3-связями; все моносахаридные остатки, замещенные в положении 4, являются 3 6-ангидропроизводными L-изомера, тогда как остатки, замещенные в положении 3, представляют собой немодифицированный D-изомер. Содержание остатков серной кислоты в агарозе невелико212, а точное их местоположение не установлено. [30]

Страницы: 1 2 3 4