Агароза
Cтраница 4
Агар представляет собой смесь агарозы и агаропектина. Главный полисахарид состоит из чередующихся остатков D-галактозы и 3 6-ангидрогалактозы, соединенных в линейную цепь 3 - 1 4 - и 1 3-связями. Агаропектин имеет более сложное строение: в состав его входят D-галактоза, 3 6-ангидрогалактоза, соответствующие уроновые кислоты и сульфат. [47]
Одним из доказательств строения агарозы является мягкий кислотный гидролиз, дающий агаробиозу I; при ферментативном гидролизе, расщепляющем избирательно р - 1 4-связи, образуется неоагаробиоза II. Ряд других методов подтверждает приведенную выше структуру агарозы. Сульфатные остатки содержатся в агарозе в небольших количествах. В агаре агароза присутствует в смеси с другим полисахаридом агаропектином. [48]
Эффективность гидрофобной хроматографии на агарозе повышается, если ее поверхность модифицируют закреплением на ней гидрофобных молекул. Все эти и некоторые другие аналогичные производные агарозы выпускает фирма Miles. При хроматографии на аминоалкилагарозах наряду с гидрофобными взаимодействиями во фракционировании белков участвуют, по-видимому, также и ионные. На 1 мл набухшего геля приходится 15 - 20 мкмоль алкильных заместителей, что позволяет сорбировать до 10 мг белка. Фирма обращает внимание потребителей на то, что связи между алкильными цепями и агарозой не абсолютно прочные и может наблюдаться небольшое подтекание заместителей. Это не снижает характеристик колонок, однако между экспериментами их рекомендуется промывать 1 М NaCl и водой, а затем снова уравновешивать рабочим буфером. [49]
Другим источником неспецифической сорбции агарозой является сера [35], которая может быть почти полностью удалена щелочной десульфуризацией в присутствии борогидрида натрия с последующим восстановлением алюмогидридом лития в диоксане. [50]
Главной особенностью гелей агара и агарозы является пригодность для фракционирования веществ с большим молекулярным весом, которые не удается разделить на сефадексе G-200 или биогеле Р-300. Агар и агароза при нагревании становятся жидкими. В связи с этим их гели при температуре выше 50 С теряют стабильность. [51]
В настоящее время агар и агароза находят широкое применение в биохимических исследованиях. Очищеннвя от заряженных примесей агароза в водной среде образует гель с большими порами, рвзмер которых определяется ее концентрацией. Следует подчеркнуть, что цепи агврозы в геле связаны не ковалентно. [52]
Ионообменники на основе целлюлозы и агарозы имеют меньшую емкость, чем ионообменные сефадексы. [53]
Помимо аффинного сорбента на основе агарозы, несущего краситель Cibacron Blue F3GA ( Affi-Gel Blue), фирма выпускает еще два сорбента, несущие, помимо этого красителя, также анионооб-менные ( диэтиламиноэтил) или катионообменные ( карбоксиметил) группы: DEAE Affi-Gel Blue и CM Affi-Gel Blue. Первый из них предназначен для высокоэффективной очистки IgG, который обычно сорбентом не задерживается, в то время как почти все остальные белки сыворотки ( кроме трансферрина) остаются на колонке. [54]
Иммобилизация ЛДГ на активированной бромцианом агарозе позволяет достаточно легко получать различные формы ЛДГ, в частности мономер. В зависимости от условий эксперимента и степени активации носителя в образовании ковалентных связей между белком и ага-розой может участвовать различное число субъединиц фермента. Необходимым условием получения мономерной формы является наличие препарата ЛДГ, иммобилизованного через одну субъединицу. [55]
Поскольку максимальная скорость потока на агарозе сравнительно низка, не рекомендуется применять очень длинные колонки. Эти ограничения не касаются сефарозы ( Sepharose, фирма Pharmacia) и биогеля А, которые настолько эластичны, что столбик геля сжимается при увеличении скорости потока. Эти гели необходимо оберегать от контакта с органическими растворителями или другими денатурирующими агентами ( например, мочевиной), поскольку в таком случае структура геля необратимо нарушается. При применении высококонцентрированных солевых растворов следует на небольшой пробе предварительно убедиться в том, что они не разрушают гель. Для предохранения геля от зарастания в элюент всегда следует вводить 0 02 % азида натрия. [56]
Страницы: 1 2 3 4