Cтраница 4
В данной задаче ферментативный процесс прекращают, нагревая пробы в кипящей водяной бане. В связи с этим в пробы 1 и 2 ( до инкубации) добавляют инактивированный нагреванием экстракт. Инактивацию проводят следующим образом: наливают в пробирку 3 мл экстракта и помещают в кипящую водяную баню на 5 мин, после чего охлаждают во льду. Пробы 3 - 4 перед добавлением субстрата преинкубируют в присутствии имидазольного буфера и Mg 2 при комнатной температуре 15 мин для активации фосфоглюкомутазы. В пробы добавляют субстрат и все четыре пробы ( 1 - 4) инкубируют 30 мин в водяном термостате при 30 С. По окончании инкубации пробы нагревают в кипящей водяной бане в течение 2 мин и помещают в лед. Во все пробы приливают по 2 мл дистиллированной воды и в случае необходимости фильтруют. [46]
Процесс заключается в том, что в раствор, содержащий индий, погружают два электрода, соединенных между собой медной проволокой: платиновый катод и цинковый анод. Между электродами создается некоторая разность потенциалов, заставляющая ионы индия направляться к катоду, на котором они разряжаются и оседают количественно плотным слоем. Катод взвешивают до и после осаждения на нем индия. Процесс ведется при 70 С и рН 3 5 3 8 в присутствии виннокислого буфера. [47]
Под общим азотом понимают сумму общего аммиака и пиридиновых оснований в пересчете на аммиак, а под общим аммиаком - сумму свободного и связанного аммиака. Общий азот определяется по Кьельдалю. Летучие основания отгоняют с паром из подщелоченной воды в приемник с определенным количеством серной кислоты известной нормальности. Избыток серной кислоты титруют раствором едкого натра. По количеству серной кислоты, израсходованному на связывание всех отогнанных оснований, вычисляют содержание общего азота в исследуемой воде в пересчете на аммиак. Затем от полученного дистиллята в присутствии буфера ( однозамещенной фосфорнонатриевой соли) отгоняют с паром пиридиновые основания. Отгон принимается в раствор серной кислоты определенной нормальности. Избыток серной кислоты оттитровывают раствором едкого натра и по количеству серной кислоты, израсходованной на связывание пиридиновых оснований, рассчитывают содержание последних. Общий аммиак определяют по разности между содержанием общего азота и содержанием пиридиновых оснований. В случае необходимости общий аммиак может быть определен по Кьельдалю в дистилляте общего азота после отгонки от него пиридиновых оснований. [48]