Окрашенное пятно

Cтраница 4

В основе этого метода лежит изучение характерно окрашенных пятен, получаемых на фильтровальной бумаге после нанесения на нее капли исследуемого вещества и реактива. [46]

Иммунологический скрининг геномной библиотеки ( иммунологическое тестирование колоний. Клетки после транстформации высевают на твердую питательную среду, обеспечивающую рост только трансформированных клеток. 1. Переносят клетки из каждой выросшей колонии на твердую подложку ( например, нитроцеллю-лозный или найлоновый фильтр так, чтобы их расположение в точности соответствовало таковому на чашке. 2. Клетки подвергают лизису, белки фиксируют на фильтре. 3. Наносят на фильтр первые антитела, которые связываются только с искомым белком. 4. Несвязавшиеся первые антитела удаляют, наносят на фильтр вторые антитела, специфичные в отношении первых антител, связанные с ферментом ( например, щелочной фосфатазой. [47]

Отбирают колонии на чашке, соответствующие окрашенным пятнам на фильтре, и культивируют их. В них может содержаться рекомбинантная ДНК, кодирующая белок, гомологичный первым антителам. [48]

Идентификация каждого компонент а смеси по окрашенному пятну производится на основании расчета величины коэффициента распределения Rf. Коэффициент распределения характеризуется отношением расстояния х ( в мм), пройденного веществом от линии нанесения вещества ( линия старта) до центра пятна, к расстоянию у ( в мм), пройденному растворителем от той же линии старта до фронта растворителя. [49]

При наличие большого избытка HNO2 ( образование интенсивно окрашенного пятна при помещении капли раствора на ИКБ) в реакционную массу добавляют постепенно ( по каплям. Обычно его расход не превышает 4 мл. Раствор 4-нитробензолдиазония необходимо сразу использовать в последующей операции ( хранить его не более 1 ч 0 С в темноте. [50]

Ионы в капельном анализе обнаруживают по образованию характерных окрашенных пятен на фильтровальной бумаге. Присутствие искомого иона доказывается образованием окрашенного в характерный цвет пятна или кольца. Железистосинеродистый калий с Fe3 образует синее пятно берлинской лазури. [51]

Скрининг библиотеки геномной ДНК с применением меченого зонда. Клетки после трансформации высевают на твердую питательную среду, обеспечивающую рост только трансформированных клеток. 1. Переносят клетки из каждой выросшей колонии на твердую подложку ( например, нитроцеллюлозный или найлоно-вый фильр так, чтобы их расположение соответствовало таковому на чашке. 2. Клетки лизируют, высвободившуюся ДНК подвергают денатурации и депротеинизации и фиксируют на фильтре. 3. На фильтр наносят меченый ДНК-зонд и проводят гибридизацию. Смывают с фильтра негибридизовавшийся зонд и проводят радиоавтографию с тем чтобы определить, какие клетки содержат меченый ДНК-зонд. 4. Идентифицируют на чашке колонии, содержащие искомую ДНК ( положительный гибридизационный сигнал, отбирают из них материал и культивируют. [52]

Те клетки на чашке, которые соответствуют окрашенным пятнам на фильтре, содержат или полноразмерный ген, или достаточно протяженный его участок, обеспечивающий синтез белкового продукта, узнаваемого первыми антителами. По окончании иммунологического скрининга геномной библиотеки необходимо определить, какой именно из отобранных клонов содержит полноразмерный ген. [53]

Компаратор для сравнения окрасок реактивной бумаги в проходящем свете. [54]

Для колориметрирования пробу помещают в компаратор со стандартными окрашенными пятнами. Сравнение окраски пробы проводят в проходящем ( лучше искусственном) свете. [55]

Страницы: 1 2 3 4