Cтраница 3
Для разделения аминокислот, пептидов и белков применяли методы гель-фильтрации на сефадексе. Такой выбор весьма логичен, так как сефадекс обеспечивает разделение соединений в соответствии с их молекулярными массами. [31]
Для разделения аминокислот Мартином и Сингом71 применялась распределительная хроматография, причем в качестве носителя для водной фазы использовался силикагель, способный удерживать количество воды, приблизительно равное половине го собственного веса. [32]
Для разделения аминокислот используют бумагу для хроматографии № 1 или 2, предварительно обработанную раствором 8-оксихинолина или раствором трилона Б для удаления следов катионов металлов. [33]
Для разделения аминокислот ( гидролизата белка) методом тонкослойной хроматографии широкое применение находят пластинки, покрытые тонким слоем ионообменной смолы полистирольной природы с сульфокислотными группировками ( типа Дауэкс 50X8) или ионообменной целлюлозой. Такие пластинки выпускаются промышленностью, например Фиксион 50x8 ( Венгрия), или могут быть приготовлены в лаборатории. В этих пластинках катионообменная смола находится в Na-форме. Пластинки стабильны в водных и органических растворителях, инертны по отношению к окислителям и восстановителям, но подвергаются воздействию щелочей и концентрированных кислот. [34]
Для разделения DNS-производных аминокислот обычно применяют двухмерную хроматографию, однако при наличии больших количеств побочных продуктов замещения ее проведение наталкивается на трудности, особенно в процессе определения DNS-производных основных аминокислот и o - DNS-производных тирозина. [35]
Метод разделения аминокислот ( лейцин, изолейцин) с предварительным окислением до альдегидов. [36]
Попытки разделения аминокислот методами распределительной или адсорбционной хроматографии в целом были безуспешными, что, по-видимому, объясняется примерно одинаковой растворимостью и близкими адсорбционными свойствами этих соединений. Наиболее перспективным методом оказалась ионообменная хроматография, где разделение осуществляется в соответствии с зарядом, или, точнее говоря, в соответствии с константами диссоциации разделяемых веществ. [37]
При разделении аминокислот во втором направлении хроматографию также ведут до тех пор, пока растворитель не поднимется по пластинке на 5 см, тогда ее вынимают, высушивают при 105 С до полного исчезновения запаха фенола ( под тягой. Высушенную пластинку опрыскивают раствором нингидрина и снова прогревают в течение нескольких минут в сушильном шкафу при 100 - 105 С. Па пластинке появляются пятна аминокислот красновато-фиолетового или сине-фиолетового цвета. [38]
При разделении аминокислот и пептидов обычно пользуются трех-компонентными системами: к насыщенному водой органическому растворителю добавляют кислоты, основания, некоторые спирты, кетоны и др. Это приводит, во-первых, к повышению растворимости воды в подвижной фазе ( увеличению гидрофильности системы), во-вторых, к изменению диссоциации кислых и основных групп разделяемых соединений. Вследствие этого кислоты замедляют движение оснований, а основания - кислот. [39]
При разделении аминокислот вместе с солями кальция ( см. рис., в) наблюдается расплывание проб и искажение относительной скорости движения отдельных представителей смеси-изменение величин Rf. [40]
При разделении аминокислот механизм этого процесса зависит, например, от степени ионизации индивидуальных кислот, зарядов присутствующих ионов и вандерваальсовых сил, действующих между ионитом и раствором. Это особенно выдерживается при повышении температуры, когда можно ожидать уменьшения влияния сил Ван-дер - Ваальса. [41]
При разделении аминокислот смесью к-бутанола, уксусной кислоты и воды ( 4: 1: 5) в кювету наливают верхний слой ( см. стр. После каждого пропускания бумагу высушивают и вновь помещают в камеру. Затем образовавшуюся хроматограмму высушивают на воздухе и проявляют нингидрином. [42]
Аналогичным образом разделение аминокислот и низкомолекулярных пептидов пытались осуществить Чудзик и Клейн [48]; сочетанием бумажной хроматографии и электрофореза в слое сефадекса G-25 им удалось отделить ди - и трипептиды от составляющих их аминокислот. Поскольку в гелях сефадекса отсутствует эндоосмос, они применяются в качестве пористого носителя и при электрофокусировании. [43]
Данные по разделению аминокислот, полученные при использовании растворителей на основе бутилового спирта, говорят об их относительном сходстве, но при работе с растворителем, содержащим муравьиную кислоту, получаются более диффузные пятна. [44]
Чрезвычайно широко используется разделение аминокислот в белковых гидролизатах с помощью ионообменной хроматографии. [45]