Cтраница 3
Описан процесс разделения ацетатных производных метиловых эфиров желчных кислот; компоненты выходят в последовательности: литохоле-вая, дезоксихолевая, хенодезоксихолевая, холевая, гиодезоксихолевая, гио-холевая 01-мурихолевая, ( 0 -мурихолевая и р-ыурихолевая кислоты. [31]
Хотя жирные кислоты можно определять непосредственно на колонке с Н3Р04 - LAG - 2R - 446 [129], в большинстве случаев они определяются в виде метиловых эфиров, так как последние более летучи и не димеризуются в растворенном состоянии, тогда как склонность к димеризации свободных кислот может привести к потерям при их разделении. До настоящего времени осуществлено разделение метиловых эфиров жирных кислот до С36, а свободных жирных кислот до С22 - Радин и другие [141 ] использовали кеталь, 2 2-диметоксипропан для количественного приготовления сложных метиловых эфиров. При метилировании часто применяется диазометан; однако его применение затруднено необходимостью использования только в свежеприготовленном виде, а также его токсичностью и взрывоопасностью. Кроме того, Стоф-фел и другие [158] обращают внимание на то, что при метилировании ненасыщенных жирных кислот по этому методу могут образоваться пиразолины. [32]
Бейдингс [139] показал, что на процесс разделения метиловых эфиров положительно влияет отсутствие кислорода в атмосфере. Целесообразно также добавлять антиоксидант к растворителю, используемому для разделения метиловых эфиров или других липидов. Врен и Щепановска [140] добавляют к элюирующему растворителю 0 005 % 4-метил - 2 6-ди-грет - бутилфенола. Нейдер-фер и Ли [141] предпочитают пользоваться 1 4-диокси - 2-грег-бутилбензолом в качестве антиоксиданта. [33]
В некоторых работах разделение на неспецифических адсорбентах с помощью полярных элюентов было названо жидкостной хроматографией с обращенными фазами. Впервые этот вид жидкостной хроматографии был использован Болдингом [25] в 1948 г. для разделения метиловых эфиров жирных кислот. В настоящее время таким способом разделяют конденсированные ароматические углеводороды [26, 27], витамины [27, 28], инсектициды [29], антибиотики [30], стероиды [26] и многие другие вещества. Этот вариант жидкостной хроматографии был также назван обращенно-фазовой хроматографией [29, 31-33] в том смысле, что в жидкостно-адсорбционной хроматографии обычно применяли специфический адсорбент и неспецифический элюент, в то время как в этом варианте - наоборот. Однако термин обращенно-фазовая хроматография имеет лишь формальный характер и этот вариант хроматографии с точки зрения теории адсорбции из растворов ни в коей мере не является необычным или обращенным. Этот неудачный термин не способствует раскрытию молекулярной основы разделения, поэтому в дальнейшем он нами не применяется. По существу же различие между обычной и обращенно-фазовой жидкостной хроматографией заключается в том, что в первом случае разделение происходит преимущественно за счет различий в специфических взаимодействиях компонентов и элюента со специфическим адсорбентом, а во втором случае - преимущественно за счет различий в неспецифических взаимодействиях молекул компонентов и элюента с адсорбентом, а также, если это имеет место, - за счет различий в специфических взаимодействиях молекул компонентов с элюентом. [34]
Если пептиды разделяют в виде их N-пентафторпропионилпентафторпропиловых эфиров, то для их обнаружения можно применять очень чувствительный детектор по захвату электронов. В работе [288] описано разделение метиловых эфиров N-ацетилпептидов и сполна метилированных пептидов, однако такие производные относительно низко летучи. [35]
Разделение метиловых эфиров проводили на силикагеле в смесях диэтилового и петролейного ( 35 - 45 С) эфиров; методом многостадийного элюирования смесями с переменным соотношением этих двух составных частей растворителя можно разделить компоненты смеси по классам, выделяя каждый раз один класс соединений. [36]
Хроматографическое разделение липидо: в могло быть осуществлено лишь после введения Рамсаем и Паттерсоном [1] в 1948 г. принципа обращенных фаз. В этом методе хроматографируемые вещества растворены в неподвижной гидрофобной фазе и разделяются вследствие непрерывного распределения между нею и подвижной гидрофильной фазой. В 1950 г. Болдинг [2] употребил для разделения метиловых эфиров высших жирных кислот обработанную вулканизованным латексом бумагу и смесь равных объемов ацетона и метанола в качестве растворителя; однако после погружения хроматограммы в растворы липофильных красителей пятна были плохо различимы на интенсивно окрашенном фоне. Высшие жирные кислоты этим методом не могли быть разделены. [37]