Cтраница 4
Результаты анализа находят, пользуясь расчетным графиком. Для его построения в ряд мерных колб емкостью по 50 мл вводят различные объемы стандартного раствора фосфатов ( О - нулевая проба; 1; 2; 5; 10 и 20 мл), затем добавляют в каждую колбу по 5 мл серной кислоты и по 2 мл раствора молибдата аммония. После этого дистиллированной водой доводят объем жидкости в каждой колбе примерно до 40 мл, тщательно перемешивают жидкости и спустя 2 мин вводят по 10 - 15 капель раствора хлористого олова. Перемешав жидкости, доводят их объем дистиллированной водой до метки, вновь хорошо перемешивают и через 5 лши колориметрируют с красными светофильтрами, помещая в кювету сравнения нулевую пробу. [46]
Растворы для построения калибровочной кривой можно готовить из навески чистой меди, например 1 г, добавляя известные количества стандартного раствора фосфата. [47]
К 1 мл фильтра добавляют 1 0 мл воды, 0 4 мл молибденового реактива и 0 1 мл, рабочего раствора эйконогена, хорошо перемешивают и оставляют на 10 мин в термостате при 37 С. Раствор быстро охлаждают и тотчас же колори-метрируют на ФЭКе. Одновременно строят калибровочный график по стандартным растворам фосфата, содержащим от 0 2 до 2 мкмоль фосфата в пробе ( с. По разности содержания неорганического фосфата в пробах после ферментативного гидролиза и в контрольной пробе рассчитывают количество фосфата, образовавшегося в процессе ферментативного расщепления АТФ. Затем рассчитывают активность миозина - в мкмолях превращенного субстрата за 1 мин на 1 мг белка. [48]
После этого из элюата отбирают 1 - 1 5 мл и проводят минерализацию ( с. После минерализации определяют фосфат по Бартлетту. Пробирки помещают в кипящую водяную баню точно на 7 мин. Параллельно ставят пробы со стандартными растворами фосфата, содержащие от 0 02 до 0 12 мкмоль фосфора в пробе. После охлаждения пробы колориметрируют при 830 нм. [49]