Cтраница 4
После образования полос преципитации производят элюирование из агарового геля тех белков, которые не участвовали в реакции преципитации. Для этого агаровую пластинку заливаютО 9 % - ным раствором NaCl и проводят элюирование в течение 48 ч, 2 - 3 раза в день меняя элюирующую жидкость. [46]
По мере - надобности ее используют в реакции Кумбса. При хранении титр преципитинов постепенно снижается, поэтому перед употреблением содержимое каждой ампулы титруют в реакции агглютинации на ге-тероантитела и в реакции преципитации. Не рекомендуется повторное замораживание оттаянных сывороток. [47]
Некоторые данные по этому вопросу получены главным образом путем применения реакции задержки по Ландштейнеру. Ландштейнер [19] установил, что продукты гидролиза шелка - пептиды с молекулярным весом около 600 - 1000 - способны специфически подавлять реакции преципитации сыворотки против шелка. [48]
По окончании инкубации мембрану извлекают из масла и через некоторое время, когда стечет его избыток, быстро проводят через эфир. После этого мембрану на 1 - 5 ч помещают в физиологический раствор хлористого натрия для удаления растворимых белков, не участвовавших в реакции преципитации; затем ее извлекают, промокают фильтровальной бумагой и окрашивают для выявления полос преципитации, как описано на стр. [49]
При внесении в специфическую иммунную сыворотку растворимого белкового антигена происходит реакция преципитации. Количество преципитирующих антител в неразведенной или в разведенной в 10 раз антисыворотке можно охарактеризовать тем наибольшим разведением антигена, которое еще способно вызвать реакцию преципитации с данной сывороткой; это разведение называется титром преципитинов. [50]
Готовят ряд двукратных разведений иммунной сыворотки в объеме 0 2 - 0 5 мл и в каждую пробирку вносят равный объем раствора антигена в том разведении, при котором еще происходит реакция преципитации. Пробирки инкубируют при 37 С в течение 60 мин, оставляют на ночь в холодильнике и учитывают реакцию на следующий день. [51]