Cтраница 3
Для обнаружения энтеротоксина Cl, perfringens широко применяются серологические методы, основанные на взаимодействии токсина с гомологичными антителами, такие, как реакция пассивной гемагглюти-нации и реакция диффузионной преципитации и иммуноэлектрофорез. [31]
Что касается характера выявляемых антител, то следует подчеркнуть возможность индукции преципитинов с двух - и мультивалентными гаптенами; кроме того, способность моновалентных гаптенов задерживать реакцию преципитации указывает на соединение их с преципити-рующими антителами. Однако, возможно, реакция Уанье, которую называют в последние годы реакцией микропреципитации, и не связана с преципитинами. Дело в том, что многие авторы, использующие ее для - выявления противотканевых антител, отмечали корреляцию с РПГА. Как бы то ни было, все же точку зрения на реакцию Уанье как на иммунологическую реакцию выявления антител следует признать достаточно правомерно. [32]
Для реакции преципитации оптимальными являются те значения температуры, рН и ионной силы среды, которые существуют в организме. Ход реакции преципитации зависит от ионной силы раствора: с увеличением концентрации соли выше 0 15 М постепенно замедляется образование преципитата. В то же время рН среды в довольно широком диапазоне, от 6 5 до 8 6, не влияет на реакцию преципитации. [33]
Иммунохимические методы, основанные на реакции преципитации, очень удобны для качественного и количественного анализа белков, для определения гомогенности белковых препаратов и наличия в них примесей, а также для идентификации компонентов белковых смесей. Как вспомогательный метод реакция преципитации применяется для изучения структуры белка. Преимущество этого метода по сравнению с другими состоит в том, что он может быть использован тогда, когда нельзя провести количественный химический анализ, например при определении данного компонента в смеси белков. Именно в этих случаях результаты, полученные с помощью иммунохимических реакций, могут быть очень полезны. [34]
После того как реакция преципитации закончится, образовавшийся преципитат осаждают центрифугированием при 2000 об / мин в течение 60 мин. [35]
Появление антител в крови после введения чужеродного белка может быть легко обнаружено различными путями. В этом случае реакция преципитации может быть получена с белками сыворотки крови только барана, но не какого-либо другого вида животного. Таким образом, реакция преципитации имеет строгую видовую специфичность. Видовая специфичность белков весьма устойчива и может сохраняться длительное время. Так, при помощи реакции преципитации удалось, например, показать тождество белков, полученных из мышц высохших мумий египетских фараонов, пролежавших в замурованных гробницах несколько тысяч лет, с белками мышц ныне живущих людей; таким же путем была доказана большая близость тканевых белков ископаемого мамонта, сохранявшегося в промерзшей почве Сибири в течение нескольких десятков тысяч лет, к белкам мышц современного слона. Наконец, таким же путем была обнаружена близость человека к высшим антропоидным обезьянам. [36]
Главной чертой иммунохимических реакций является высокая специфичность, однако необходимо подчеркнуть, что структурное сходство некоторых белков, а также гетерогенность антител, иногда свойственная сывороткам, при определенных условиях становятся причиной так называемых перекрестных реакций. Это означает, что реакция преципитации может в определенной степени зависеть от неспецифических факторов. Однако последнее обстоятельство лишь незначительно ограничивает использование иммунохимических реакций в изучении белков. [37]
Анализ элюата ведут по поглощению при 254 нм. Вирус определяют серологически по реакции преципитации, а также измерением двойного лучепреломления в потоке в условиях низкого и промежуточного градиентов скорости на проточном рефрактометре поляризационного типа. [38]
Полосы преципитации, как правило, располагаются в том участке геля, в котором создается оптимальное соотношение концентраций антигена и антител. При относительно большем разведении антисыворотки реакция преципитации происходит вблизи границы агара, содержащего иммунную сыворотку. Если же используются относительно разбавленные растворы антигена, реакция преципитации наблюдается ближе к границе агарового слоя, содержащего антиген. В соответствии с этим располагаются полосы преципитации. [39]
При этом определяют наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще образуется преципитат со взятым по титру антигеном. Считается, что в этих условиях реакция преципитации протекает в зоне эквивалентности. [40]
В частности, для серологических исследований / проведение реакции преципитации для выявления сходства в строении вирусов / обосновано создание набора схем планирования, которые обеспечивают испытание каждого из исследуемых вирусов в соседстве со всеми другими по минимуму опытов. [41]
Этот метод представляет собой своеобразную комбинацию электрофоретического и иммунологического методов анализа белков. Иными словами, термин иммуноэлектрофорез подразумевает проведение электрофореза и реакции преципитации в одной среде, т.е. непосредственно на гелевом блоке. При данном методе с помощью серологической реакции преципитации достигается значительное повышение аналитической чувстительности электрофоретического метода. [42]
Если раствор антигена ( например, раствор белка) в адекватных пропорциях смешать с сывороткой, содержащей специфические антитела ( иммунной сыворотка и), то я результате реакции образуется преципитат, образованный молекулами антигена и антител. Наибольшее разведение иммунной сыворотки, при котором еще происходит реакция преципитации с антигеном, присутствующим в постоянной концентрации, называют титром данной сыворотки. [43]
Ответ будет таким: с простыми гаптенами, такими, как метаниловая кислота, обычно видимой реакции не происходит. Вначале предполагали, что молекула простого гаптена слишком мала, чтобы участвовать в реакции преципитации. Гаптены, содержащие две или более реактивные группы, в некоторых случаях вступают в реакцию и преципитируют с соответствующими антителами. [44]
Гаптенное ингибирование представляет собой достаточно простой метод определения относительной стабильности приципитатов, образованных конканавалином А и рядом полисахаридов. Мерой стабильности служит число микромолей метил-а-в-маннопиранозида, вызывающее 50 % - ное ингибирование реакции преципитации с данным полисахаридом. Стабильность преципитатов, несомненно, связана с такими особенностями структуры молекулы полисахарида, как природа и относительное количество терминальных невосстанавливающих гликозильных остатков, а также длина боковых цепей. Если боковые цепи полисахарида содержат по одному моносахаридному остатку, комплекс конканавалина А с этим полисахаридом очень легко диссоциирует под действием метил-а-о-маннопиранозида. [45]