Cтраница 3
При положительном результате противовирусные антитела блокируют размножение вируса в культуре клеток, и под действием кислых метаболитов последних в среде меняется цвет индикатора. Смесь выдерживают при комнатной температуре 30 - 60 мин, добавляют в каждую пробирку по 0 25 мл клеточной суспензии и закрывают их резиновыми пробками или заливают стерильным вазелиновым маслом. Пробирки помещают в термостат на 6 - 8 дней при 37 С. Результаты реакции учитывают колориметрически: рН 7 4 и выше указывает на репродукцию вируса, 7 2 и ниже - на нейтрализацию вируса антителами. [31]
Вирус гепатита А попадает в организм человека с водой или пищей, репродуцируется в эпителии слизистой оболочки тонкой кишки и регионарных лимфоидных тканях. Затем возбудитель попадает в кровоток с развитием кратковременной вирусемии. Максимальные титры вируса в крови выявляют в конце инкубационного и в преджелтушном периодах. В это время возбудитель выделяется с фекалиями. Репродукция вируса в их цитоплазме приводит к нарушению внутриклеточных метаболических процессов и гибели клеток. Цитопатический эффект усиливают иммунные механизмы, в частности NK-клетки, синтез которых индуцируется вирусом. [32]
С использованием метода иммуноферментного анализа показано, что гипорамин ингибирует репродукцию респираторно-синцитиального вируса в культуре клеток, причем его ингибирующий эффект на вирусную репродукцию усиливается с увеличением его концентрации ( 21 8 % - 1 мкг / мл; 73 % - 20 мкг / мл) и уменьшается с увеличением множественности заражения клеток вирусом ( 65 5 % - 0 1 TCD / кл. Сравнительное изучение в системе ИФА гипорамина и виразола показало, что гипорамин ингибировал вирусную репродукцию практически на уровне виразола. Минимальные ингибирующие концентрации 50 ( МИК 50) этих препаратов мало отличаются и равны 5 мкг / мл для виразола и 7 мкг / мл для гипорамина. Установлено также, что ингибирующий эффект на репродукцию респираторно-синцитиального вируса связан с его воздействием на ее ранние этапы. Полученные данные перекликаются с результатами экспериментов по изучению механизма действия гипорамина в отношении вируса гриппа, показавшие, что препарат не действует на вирусную транскрипцию и трансляцию, не обладает эффектом на активность нейраминидазы-поверхностного гликопротеина вируса гриппа, участвующего в расщеплении гликозидной части нейраминовой кислоты с полисахаридной частью клеточного рецептора. С использованием метода ИФА показано, что гипорамин оказывал ингибирующий эффект на репродукцию вируса гриппа А / Япония / 305 / 57 только при добавлении его к клеткам до их инфицирования. Совокупность этих данных позволяют связать ингибирующий эффект гипорамина на репродукцию вируса гриппа и респираторно-синцитиального вируса с его воздействием на ее ранние стадии. [33]
Обычно для этих целей используют метеды ингибирования БОА и ЦПД. Однако, в первом случае из-за использования агарового покрытия для получения ответа требуется несколько дней, эффект ЦПД развивается медленно, не всегда бывает убедительным и не оценивается количественно. Изложенными выше причинами объясняется все более широкое использование ИФА в химиотерапии различных инфекций. Суть метода состоит в следующем. После заражения клеток вируса на их поверхности через определенные интервалы времени начинается экспрессия вирусных антигенов, которые после фиксации клеток выявляются ИФА. Влияние различных веществ на уровень экспрессии вирусных полипептидов позволяет судить об их действии на репродукцию вируса в культуре клеток. [34]
С использованием метода иммуноферментного анализа показано, что гипорамин ингибирует репродукцию респираторно-синцитиального вируса в культуре клеток, причем его ингибирующий эффект на вирусную репродукцию усиливается с увеличением его концентрации ( 21 8 % - 1 мкг / мл; 73 % - 20 мкг / мл) и уменьшается с увеличением множественности заражения клеток вирусом ( 65 5 % - 0 1 TCD / кл. Сравнительное изучение в системе ИФА гипорамина и виразола показало, что гипорамин ингибировал вирусную репродукцию практически на уровне виразола. Минимальные ингибирующие концентрации 50 ( МИК 50) этих препаратов мало отличаются и равны 5 мкг / мл для виразола и 7 мкг / мл для гипорамина. Установлено также, что ингибирующий эффект на репродукцию респираторно-синцитиального вируса связан с его воздействием на ее ранние этапы. Полученные данные перекликаются с результатами экспериментов по изучению механизма действия гипорамина в отношении вируса гриппа, показавшие, что препарат не действует на вирусную транскрипцию и трансляцию, не обладает эффектом на активность нейраминидазы-поверхностного гликопротеина вируса гриппа, участвующего в расщеплении гликозидной части нейраминовой кислоты с полисахаридной частью клеточного рецептора. С использованием метода ИФА показано, что гипорамин оказывал ингибирующий эффект на репродукцию вируса гриппа А / Япония / 305 / 57 только при добавлении его к клеткам до их инфицирования. Совокупность этих данных позволяют связать ингибирующий эффект гипорамина на репродукцию вируса гриппа и респираторно-синцитиального вируса с его воздействием на ее ранние стадии. [35]