Cтраница 2
Расщепление поли-8 - азагуаниловой кислоты [571] дает убедительный пример более широкой специфичности панкреатической рибонуклеазы. [16]
В случае пиримидина такое замещение ( при N1) сообщает устойчивость к действию панкреатической рибонуклеазы; при обработке РНК с последующим перевариванием ферментом получаются осколки цепи значительной длины ( так как расщепляются только цитидилил - З - связи), цитидиловая кислота, и лишь следы уридин - З - фосфата. [17]
Природа продуктов расщепления, образующихся при гидролизе синтетических олигомеров щелочью, диэстеразой яда и панкреатической рибонуклеазой полностью соответствует приписанной олиго-мерам структуре и последовательности оснований. [18]
Ниже излагается основная идея метода, которая иллюстрируется на примере восстановления полной первичной структуры из фрагментов бычьей панкреатической рибонуклеазы. [19]
Используя значения рА для участвующих в катализе остатков гистидина, определите, при каком значении рН Vmax для панкреатической рибонуклеазы достигает максимального значения и в каком интервале значений рН Упхях уменьшается не больше чем на 10 % от максимального значения. [20]
Таким образом, установленные экспериментально структура активного центра и схема расположения в нем аналога субстрата логично объясняют все характерные особенности действия панкреатической рибонуклеазы. [21]
Распределение остатков адениловой кислоты в РНК вируса табачной мозаики было определено путем количественного анализа продуктов, образующихся в результате комбинированного действия панкреатической рибонуклеазы и рибонуклеазы Т1 из такадиастазы. [22]
Сказанное можно пояснить на примере фермента, активный центр и механизм действия которого достаточно хорошо изучены и который будет ниже детально рассматриваться, - панкреатической рибонуклеазы. Этот фермент катализирует двустаДийный гидролиз фосфодиэфирных связей в РНК, сходный в общих чертах со щелочным гидролизом этих связей. На первой стадии происходит внутримолекулярная атака атома Р на 2 - ОН-группу примыкающего со стороны 3 -кислородного атома остатка рибозы с образованием циклического 2 3 -фосфата и разрывом межнуклеотидной связи. Во второй стадии происходит гидролиз пяти-членного фосфодиэфирного цикла. [23]
А - олигонуклеотиды, полученные при гидролизе рибосомной РНК рпбонунлеазой Т, обработаны фосфодиэстеразой селезенки. РНК панкреатической рибонуклеазой, обработаны фосфодиэстеразой селезенки. Жирными линиями показано положение неизмененных нуклеотидов, которые использовались для контроля. [24]
Функции различных типов РНК-аз и ДНК-аз в клетке разнообразны. Так, панкреатическая рибонуклеаза ( РНК-аза I) обладает экзо - и эндонуклеазным действием и катализирует деградацию всех типов РНК. Вместе с тем известны высокоспецифичные тканевые РНК-азы, расщепляющие фосфодиэфирную связь в области строго определенных нуклеотидных последовательностей и участвующие в созревании первичных транскриптов рибосомальных и транспортных РНК. [25]
Аналогичные трипсину и химотрипсину ферменты, расщепляющие по мономерным остаткам определенного типа, существуют и для рибонуклеиновых кислот. К их числу относится рассмотренная ранее панкреатическая рибонуклеаза, или, как ее сокращенно называют, РНКаза А. [26]
Обратное превращение денатурированного белка в нативный возможно лишь в случае, когда нативная структура запрограммирована в первичной структуре. Впервые это было показано на примере уже упоминавшейся в § 2.1 панкреатической рибонуклеазы. Если с помощью восстановителя разрушить эти мостики, а затем в мягких условиях провести окисление, то в основном восстанавливаются ковалентные связи между теми же остатками цнстеипн, которые были в исходном нативном ферменте, причем восстанавливается и каталитическая активность фермента. Таким образом, оказывается резко предпочтительной одна из 105 различных комбинаций, в которых могут попарно объединяться остатки цистеина. Это означает, что при окислении в мягких условиях восстановленный белок имеет пространственную организацию, близкую к натнвной. Следовательно, первичная структура рибонуклеазы уже в значительной мере предопределяет ее пространственную структуру. [27]
Ферменты, как правило, работают в определенном диапазоне рН и характеризуются некоторым оптимальным значением рН, при котором при прочих равных условиях скорость реакции имеет наибольшее значение. Причины такого характера зависимости можно пояснить на примере кинетики гидролиза цитидин-2 3 -фосфата, катализируемого панкреатической рибонуклеазой. [28]
Нуклеотиды, полученные при гидролизе РНК панкреатической рибо-нуклеазой. Метод деградации фосфодиэстеразой из селезенки дает четкие данные о природе нуклеотидов, образующихся при гидролизе РНК панкреатической рибонуклеазой. В этом случае остатки А и Г выщепля-ются с одинаковой скоростью, так что обычно образуется полный набор продуктов деградации РНК. С помощью этого метода четко определена пуклеотидная последовательность в пентануклсотидах и некоторых гекса-нуклеотидах. Области значений М довольно велики, и между ними нет четкой границы; поэтому в тех случаях, когда значения М получаются равными 0 9 - 1 5, для подтверждения результатов необходимы дополнительные данные. Крайние значения характеризуют небольшие олигонуклеотиды; поэтому во всех случаях их лучше всего идентифицировать по положению на ДЭАЭ-бумаге. [29]
В гпдролизате рибосомной РНК мы не обнаружили олигонуклеотида ЦУАГ, который должен был бы находиться в пятне 28 или рядом с ним. В гидролизатах 16S - и 238-компонентов пятно 28 содержит, по-видимому, только олигонуклеотид ЦАУГ, из которого после обработки панкреатической рибонуклеазой образуется динуклеотид АУ ( динуклеотид АГ. [30]