Cтраница 2
Первые работы в этом направлении были опубликованы в 1950 г. японскими учеными Сакагучи и Мурао [6], которые обнаружили в Penicillium chrysogenium и Aspergil-lus orizeac фермент пенициллин-амидазу, способный расщеплять бензилпенициллин на фенилуксусную кислоту и 6-аминопенициллановую кислоту. В 1953 г. Като [7] выявил наличие в культурной жидкости Penicillum chrisogenium вещества, являющегося продуктом расщепления бензил-пеиициллина пенициллиназой. [16]
О больших возможностях применения автоанализаторов в хро-матографическом лабораторном анализе свидетельствует также сообщение фирмы Техникой [49], описывающее автоанализатор, который может применяться для определения: 1) общего азота, по Кьельдалю; 2) общего белка с помощью биуретовой реакции; 3) общего белка, по Фолину ( Лоури); 4) аминогрупп с нингидрином; 5) тирозина, по Фолину; 6) гистидина, по Паули; 7) аргинина, по Сакагучи; 8) глутаминовой кислоты с декарбокси-лазой; 9) лизина с декарбоксилазой; 10) альбумина с помощью 2 ( 4 -оксифенил) бензойной кислоты. В сообщении указывается, что эти виды анализа могут быть сменены один на другой в течение 20 мин и при добавлении в автоанализатор стандартных модулей ( блоков) могут одновременно проводиться несколько видов анализа. [17]
О больших возможностях применения автоанализаторов в хро-матографическом лабораторном анализе свидетельствует также сообщение фирмы Техникой [49], описывающее автоанализатор, который может применяться для определения: 1) общего азота, по Кьельдалю; 2) общего белка с помощью биуретовой реакции; 3) общего белка, по Фолину ( Лоури); 4) аминогрупп с нингидрипом; 5) тирозина, по Фолину, 6) гистидина, по Паули; 7) аргинина, по Сакагучи; 8) глутаминовой кислоты с декарбокси-лазой; 9) лизина с декарбоксилазой; 10) альбумина с помощью 2 ( 4 -оксифенил) бензойной кислоты. В сообщении указывается, что эти виды анализа могут быть сменены один на другой в течение 20 мин и при добавлении в автоанализатор стандартных модулей ( блоков) могут одновременно проводиться несколько видов анализа. [18]
Сакагучи и высокая чувствительность к щелочам ( за исключением дигидро - С. [19]
Симе [34] применял способ определения аргинина, добавив операцию хроматографического отделения аргинина от гликоциамина. Оба соединения дают реакцию Сакагучи. Скорость течения и концентрация солей в колонке, содержащей Na-катионит, регулировались так, чтобы гликоциамин извлекался прежде аргинина. [20]
За опрыскиванием нингидрином может следовать опрыскивание а-нитрозо-р-нафтолом или реагентом Эрлиха. За реактивом Эрлиха может следовать обработка по Сакагучи, даже если предшествующими операциями были опрыскивание нингидрином или изатином. УФ-облучение и обработка иодом не мешают проведению любых последующих тестов. [21]
Производные гуатш-дина, как, например, аминокислота аргинин ( гуапидина - Миновалериановая кислота), метилгуанидин, гликоциа-мин ( гуанидинуксусная кислота), реагируя с гипоброми-том натрия ( ЫаВгО) и а-нафтолом, образуют продукт конденсации кирпично-красного или малинового цвета. Метилгуанидин и глнкоцигшин не кходят в состав белковых веществ-и поэтому реакцию Сакагучи можно использовать для открытия аминокислоты аргинина. [22]
Гистохимия, выявление белков производится в ос-I новном с помощью цветных реакций на аминокислоты и входящие в состав белковой молекулы функциональные группы. Для этой цели применяют, например, Миллона реакцию на тирозин, Сакагучи реакцию-па аргинин и др. Большое значение приобрел метод Дапиэлли, основанный на выявлении тирозина, триптофана и гистидипа белка посредством азосояе-танип с бисдиазотированным бензидипом или о-дна-низидином и последующем усилении окраски путем дополнительного азосочетания с Аш-кислотой. Азосо-четание широко используется при осуществлении гистохимия, реакций на амипо -, карбоксильные, тио-ловые и др. функциональные группы белка. [23]
Хотя способность пермутита к обмену и может быть использована достаточно удовлетворительно для отделения основных аминокислот и аммиака от других продуктов белкового гидроли-зата, тем не менее пермутит не получил широкого распространения. По сведениям авторов, пермутит был удачно применен для предварительного отделения оснований только при реакции Сакагучи [562], видоизмененной Дубновым [ 1991 Повидимому, в будущем этот реагент будет применяться более широко. [24]
Основаниями, которые но данным Вайтхорна, адсорбируются из растворов пермутитом, являются основные аминокислоты, аргинин, гистидин и лизин. Дубнов [31] использовал данные Вайтхорна для отделения аргинина из белковых гидролизатов; аргинин затем определяли количественно по способу Сакагучи. [25]
К важнейшим из них относятся: биуретовая реакция ( пептидные связи), ксантопротеииовая реакция ( аро-матич. Миллона реакция ( фенильная группа тирозина), Адамкевича реакция ( индольное кольцо триптофана), Паули реакция ( имидазольное кольцо ги-стидина), сулъфгидрилъная реакция ( серусодержащие остатки аминокислот), Сакагучи реакция ( гуаиидино-вая группа аргинина), нингидриновая реакция, пикриновая реакция. [26]
Порядок, в котором следуют экспозиции, также оказывает сильное влияние на дифракционную эффективность. Если все последовательные регистрации производить с одинаковой экспозицией, то первое записанное изображение при восстановлении будет значительно ярче других. Нисида и Сакагучи [9] опубликовали результаты, которые свидетельствуют о том, что для обеспечения одинаковой яркости всех точек восстановленного изображения необходимо увеличивать относительную экспозицию последующих регистрации по сравнению с предыдущими. [27]
Белок гидролизуют соляной кислотой ( 1: 1), доводят объем гидроли-зата до 100 мл и помещают в среднюю часть прибора. После 7 - 8-часового электролиза все аминокислоты переходят на катод. Полное удаление оснований из средней части устанавливается по реакции Сакагучи или при пробе с фосфорновольфра-ыовой кислотой. [28]
Точно так же при денатурации увеличивается число связываемых динитрофенолом гистидиновых групп, равно как и число обнаруживаемых р - и укарбоксильных групп. Так, после денатурации р-лактоглобулина количество реактивных гистидиновых остатков возрастает с двух до четырех, в случае карбоксигемо-глобина освобождаются 36 карбоксильных групп на одну молекулу белка. Увеличивается и интенсивность цветных реакций на тирозин с фосфорномолибденовой кислотой или диазореагента-ми и на аргинин при обработке реактивом Сакагучи. [29]
Практически на каждую аминокислоту имеется та или иная специфическая реакция - количественная или качественная. Однако многие из них довольно сложны и применяются редко в повседневной практике. Здесь мы рассмотрим только наиболее употребительные реакции на некоторые аминокислоты. Так, аргинин количественно определяют как в свободном виде, так и в белке с помощью реакции Сакагучи с сс-нафтолом и гипоброми-дом. Развивающаяся окраска имеет красный цвет; метод очень чувствителен и позволяет определить менее 1 мкг / мл аргинина. [30]