Cтраница 3
Однако до проведения специфического обнаружения следует снять фиолетовую окраску, вызванную нингидрином. С этой целью хроматограмму погружают в раствор концентрированной соляной кислоты в ацетоне ( 1: : 10), после чего сушат. Перед обнаружением триптофана такое обесцвечивание не обязательно, поскольку реагент на триптофан растворен в смеси кислоты с ацетоном и обесцвечивает нингидриновые пятна. Чувствительность обнаружения реагентом Паули и диметиламинобензальдегидом на хроматограммах, обработанных и не обработанных нингидрином, одинакова, а чувствительность обнаружения реагентом Сакагучи после обесцвечивания нингидриновых пятен снижается. [31]
Жидкость фильтруют через двойной слой марли или центрифугируют; в осадке остается нейрокератин, который по своему составу отличается от обычного кератина. К фильтрату добавляют около 4 - 5 капель концентрированной уксусной кислоты до слабокислой реакции на лакмус. Осадок нуклеопротеидов отделяют фильтрованием. С фильтратом, содержащим альбумины и глобулины, проделывают реакцию осаждения белков наслаиванием жидкости на концентрированную азотную кислоту ( см. стр. Осадок нуклеопротеидов промывают на фильтре водой и с небольшими порциями осадка проделывают цветные реакции на белковый компонент: биуретовую ( см. стр. Сакагучи на аргинин ( см. стр. [32]
Эти реакции широко используются для аналитических целей. Среди них широко известны нингидриновая реакция, позволяющая проводить количественное определение аминогрупп в белках, пептидах и аминокислотах, а также биуретовая реакция, применяемая для качественного и количественного определения белков и пептидов. При нагревании белка или пептида, но не аминокислоты, с CuS04 в щелочном растворе образуется окрашенное в фиолетовый цвет комплексное соединение меди, количество которого можно определить спектрофотометрически. Цветные реакции на отдельные аминокислоты используются для обнаружения пептидов, содержащих соответствующие аминокислотные остатки. Для идентификации гуанидиновой группы аргинина применяется реакция Сакагучи - при взаимодействии с а-нафтолом и гипохлоритом натрия гуанидины в щелочной среде дают красное окрашивание. Реакция Паули позволяет выявить остатки гистидина и тирозина, которые в щелочных растворах реагируют с диазобеизолсульфокислотой, образуя производные, окрашенные в красный цвет. [33]