Разделенное вещество
Cтраница 3
Устанавливают температуру испарителя и отбора разделенных веществ и температуру колонки. [31]
Второй способ предусматривает предварительное вымораживание разделенных веществ из элюата ( с использованием микропрепаративных методов) и их последующее нанесение на старт тонкослойной пластинки. [32]
В отдельных случаях для локализации разделенных веществ можно использовать такие реактивы, которые не мешают последующему применению ( после экстракции пятен) второй цветной реакции, необходимой для колориметрического определения. Для второй цветной реакции применяют другой реактив, действующий на другую функциональную группу определяемого соединения. Так можно разделять эфиры жирных кислот, локализовать их парами иода и после проявления количественно определить колориметрически, переведя эфиры в окрашенные железные комплексы гид-рок Самовых кислот [37] ( см. стр. Воспроизводимость метода была цроверена на смеси метиловых эфиров пальмитиновой, 6-оксистеариновой и 9, 10-диоксистеариновой кислот. Этим же методом были проанализированы смеси моно -, ди - и триглицеридов [37] ( ср. Гликолипо-идные фракции липоидов мозга были окрашены аммиачным раствором бром-тимолового и определены колориметрически после экстракции антронсернои кислотой [17] ( ср. Фракции липидов человеческой плазмы [11] и сфингомиелиновые компоненты липоидов мозга [17] были окрашены на хроматограмме аммиачным раствором бромтимолового Синего и озолены, и затем в их зоне колориметрически определено содержание фосфора ( ср. [33]
 |
Хроматограмма смеси пестицидов, записанная при помощи рефрактометрического детектора ( растворитель - изооктан. расход 0 8 мл / мин. колонка длиной 1 2 м. [34] |
Поскольку вытекающий из колонки растворитель содержит разделенные вещества, многие из которых имеют специфические группы, способные к поглощению, для детектирования был предложен ряд спектральных методов, основанных на измерениях поглощения света веществом в определенной части спектра, например в ультрафиолетовой или инфракрасной области. Поскольку детектирование проводится непрерывно и невозможно осуществить измерение во всем спектре поглощения, снимают лишь поглощение при фиксированной длине световой волны, которую выбирают таким образом, чтобы детектор был пригоден для измерения возможно большего числа веществ. [35]
Если, однако, можно локализовать разделенные вещества без их дальнейшего превращения, например по их собственной флуоресценции или по поглощению в ультрафиолете на пластинках, покрытых флуоресцирующим составом, и если после экстракции вещества имеются в количествах, достаточных для применения физико-химических методов определения, то эту возможность обычно следует использовать. [36]
 |
Хроматограмма смеси пестицидов, записанная при помощи рефрактометрического детектора ( растворитель - изооктан, расход 0 8 мл / мин. колонка длиной 1 2 м. [37] |
Поскольку вытекающий из колонки растворитель содержит разделенные вещества, многие из которых имеют специфические группы, способные к поглощению, для детектирования был предложен ряд спектральных методов, основанных на измерениях поглощения света веществом в определенной части спектра, например в ультрафиолетовой или инфракрасной области. Поскольку детектирование проводится непрерывно и невозможно осуществить измерение во всем спектре поглощения, снимают лишь поглощение при фиксированной длине световой волны, которую выбирают таким образом, чтобы детектор был пригоден для измерения возможно большего числа веществ. [38]
Если, однако, можно локализовать разделенные вещества без их дальнейшего превращения, например по их собственной флуоресценции или по поглощению в ультрафиолете на пластинках, покрытых флуоресцирующим составом, и если после экстракции вещества имеются в количествах, достаточных для применения физико-химических методов определения, то эту возможность обычно следует использовать. [39]
Очень часто для получения достаточного количества разделенных веществ требуется несколько раз повторять один и тот же цикл разделения. В связи с этим большие усилия были затрачены на автоматизацию процесса сбора разделенных веществ. К сожалению, такая автоматизация возможна лишь в случае относительно простых разделений, выполняемых с помощью обычных методов. Смеси же, используемые в исследовательских лабораториях, часто настолько ценны, что потери разделенных веществ, происходящие при переключении автоматического устройства для отбора фракций, совершенно недопустимы. Успешная автоматизация возможна лишь в случае абсолютно стабильной нулевой линии детектора. Программирование температуры колонки еще больше затрудняет дело. Рассмотрим, например, хроматограмму разделения эфирного масла, приведенную на рис. 7.22. Если пороговый уровень - переключения устройства для отбора фракций установить на уровне, равном 5 % полного отклонения пера самописца ( это не такой уж высокий уровень), то будет утеряна возможность отбора малых хромато-графических пиков. Можно установить разные уровни для разных пиков, но это очевидно можно сделать лишь после тщательного хроматографирования данной смеси. [40]
Второй важной технической проблемой является улавливание разделенных веществ при больших расходах газа-носителя. [41]
Существует и другой универсальный способ детектирования разделенных веществ. При приготовлении пластинок для тонкослойной хроматографии к адсорбенту прибавляют неорганический фосфор и таким образом получают флуоресцирующие пластинки. [42]
Улавливание и сбор на выходе колонки уже разделенных веществ представляет некоторые трудности. Разделенные вещества находятся в паровой фазе, для улавливания их необходимо сконденсировать. На выходе колонки для этого используют специальные сборники фракций, представляющие собой емкости, заполненные инертной насадкой. Сборник охлаждается каким-либо хладоагентом, чаще всего жидким азотом. Несмотря на низкую температуру, при которой происходит сбор фракций, полная конденсация обычно не достигается. При резком охлаждении часть вещества уносится в виде тумана или кристалликов потоком газа-носителя. [43]
Вытекающий из колонки поток растворителя с разделенными веществами попадает прежде всего в узел дозирования, в котором отмеряются дозы определенной величины для последующей подачи в систему пробирок для сбора фракций. Дозирование может осуществляться но объему, по весу или по времени. Дозирование по объему осуществляется либо с использованием сифона, объем которого строго задан и может меняться лишь с заменой ячейки, либо с использованием дозировки с изменением положения по высоте контакта для электропроводящих растворов с открыванием крана в момент замыкания цепи. При дозировании по времени через заданные промежутки времени происходит перемещение пробирок для сбора фракций. [44]
Вытекающий из колонки поток растворителя с разделенными веществами попадает прежде всего в узел дозирования, в котором отмеряются дозы определенной величины для последующей подачи в систему пробирок для сбора фракций. Дозирование может осуществляться по объему, по весу или по времени. Дозирование по объему осуществляется либо с использованием сифона, объем которого строго задан и может меняться лишь с заменой ячейки, либо с использованием дозировки с изменением положения по высоте контакта для электропроводящих растворов с открыванием крана в момент замыкания цепи. При дозировании по времени через заданные промежутки времени происходит перемещение пробирок для сбора фракций. [45]
Страницы: 1 2 3 4