Cтраница 1
Сефароза и сефароза CL поставляются в набухшем состоянии. [1]
Сефароза поставляется в виде суспензии, подсушивания которой не следует допускать ( см. гл. Разброс диаметров гранул столь же велик, как у сефадексов. Гели сефарозы жесткие, но несколько уступают в этом отношении сефакрилам. Гранулы сефарозы отличаются хрупкостью и сравнительно легко крошатся при неосторожном перемешивании. [2]
Сефароза - это гель агарозы со сферическими частицами; в продажу поступает в виде суспензии в воде ( в набухшем состоянии), содержащей 0 02 % азида натрия в качестве бактериостати-ческого агента. [3]
Сефарозу сначала постепенно переводили в сухой ацетон, промывая на фильтре последовательно серией водно-ацетоновых смесей с увеличивающимся содержанием ацетона, потом обычным и высушенным над молекулярным ситом ацетоном. Реакция шла в течение 10 мин, после чего гель промывками ацетоном и серией смесей ацетона с 1 мМ водным раствором HG1 постепенно переводили в 1 мМ HG1, где его можно хранить на холоду без инактивации по крайней мере в течение трех месяцев. Для посадки лиганд ( трипсин, ингибитор трипсина, БСА, № - ( 6-аминогек-сил) - АМФ) растворяли в холодном 0 2 М Na-бикарбонатном или Na-фосфатном буфере ( рН 7 5), содержащем 0 5 М NaCl вносили туда равный объем промытого тем же буфером сорбента и инкубировали с осторожным перемешиванием на холоду. После окончания посадки лиганда аффинный сорбент обильно промывали буфером, затем ( для удаления неспецифически сорбировавшихся примесей) 0 2 М раствором Na-ацетата ( рН 3) с 0 5 М NaCl, самим 0 5 М NaCl, водой и снова буфером. Авторы указывают, что при хранении активированного геля в течение ночи на холоду в 0 1 М Na-фосфатном буфере ( рН 7 5) инактивация практически не заметна. В тех же условиях активированная BrCN-сефароза снижает свою активность вдвое за 30 мин. Активированный трезилхлоридом полисахаридный гель можно лиофилизировать или хранить в виде суспензии в ацетоне. [4]
Эпокси-активированную сефарозу с большим успехом, чем BrCN-активированную, можно использовать для связывания полисахаридов и нуклеиновых кислот, поскольку эпоксигруппа активно присоединяется к лиганду эфирной связью по гидрокислам Сахаров. [5]
BrCN-активированную сефарозу ( 1 г) обрабатывают, как обычно ( с. Инкубируют 2 ч при комнатной температуре, осторожно перемешивая механической мешалкой. Инкубируют 2 ч при комнатной температуре, постоянно осторожно перемешивая механической мешалкой. Цикл повторяют, затем отмывают фосфатным буфером и хранят в нем при 4 С. [6]
Производное сефарозы, содержащее карбоксилатные ионы, промывают 50-кратным объемом 0 5 М хлорида натрия, измеряют объем геля после седиментации или малоскоростного центрифугирования в калиброванном центрифужном стакане. Всю эту процедуру повторяют после присоединения л-аминобензамидина; концентрацию присоединенного аффинного лиганда вычисляют исходя из разности между объемами, пошедшими на титрование в двух случаях. [7]
Суспензию сефарозы с иммобилизованной дегидрогеназой промывают 10-кратным объемом рзстворз мочевины, смешивают с 4-кратным объемом раствора мочевины той же концентрации и инкубируют суспензию при перемешивании. [8]
Препараты сефарозы с глицеральдегид-3 - фосфатдегидрогеназой, иммобилизованной при разной степени активации, помещают в колонки ( размер 0 5x3 см) и уравновешивают 0 15 М раствором NaCl. Иммуносорбент отмывают от балластных белков 0 15 М раствором NaCl до исчезновения поглощения при длине волны 280 нм в элюате. [9]
Сефароза и сефароза CL поставляются в набухшем состоянии. [10]
Для активации сефарозы используют коммерческие препараты BrCN или синтезированный в лаборатории BrCN. Синтезированный BrCN может использоваться в течение 1 - 3 дней. [11]
Суспензию 60 мл сефарозы, к которой D-галактоно-а - лактон привязан через бензидин, озвучивали в 100 мл воды, содержащей 2 мл уксусного ангидрида, в течение 10 мин в резонаторе типа бани. [12]
Однако, если сефароза не блокирована тотчас же после активации, наблюдается неспецифическая сорбция белков, которая становится тем сильнее, чем больше проходит времени между активацией бромцианом и блокированием активных центров. Препарат человеческий сывороточный альбумин-сефароза, блокированный после 12 ч после присоединения сывороточного альбумина, сорбирует только 0 4 мг белка на 1 мл геля. [13]
Считается, что сефароза устойчива в области рН 4 - 9; с ней не рекомендуется работать при температурах иже 0 С или выше 40 С. Сефароза устойчива к действию концентрированных растворов солей лли мочевины. Куатреказас [14] указывает, что на частицы агарозы существенно не влияет продолжительное воздействие 6М раствора гуанидинхлорида или 7М раствора мочевины. Поэтому агарозные аффинные сорбенты можно отмывать от белков этими денатурирующими растворами. В течение 2 - 3 ч при комнатной температуре на агарозу не действуют 0 1М гидрокоид натрия или 1М хлорная кислота. Ни 50 % - ный ( по объему) водный диметилформамид, ни 50 % - ный ( по объему) водный этиленгликоль не меняют структуру агарозы. Эта растворители полезны при аффинной хроматографии относительно плохо растворимых в воде соединений, например тироксина и стероидов. [14]
Присоединение аминов к сефарозе, активированной бромцианом, приводит, таким образом, к замещенным изомочевинам. [15]