Cтраница 4
Например, при присоединении химотрипсина к 2 мл активированной бромцианом сефарозы при рН 8 из 10 мг присутствующего белка присоединяется только 5 мг, из 20 мг - - 8 мг, а из 30 мг - - 10 мг. При комнатной температуре ( 20 - 25 С) присоединение обычно заканчивается за 2 ч, в то время как при более низких температурах рекомендуется оставлять реакционную смесь на ночь. Реакционную смесь следует перемешивать, однако не рекомендуется использовать магнитную мешалку, так как это может привести к механической деструкции геля. [46]
Иммобилизацию фосфоглицераткиназы проводят, как описано выше, используя препараты сефарозы, активированные 30 мг BrCN на 1 г геля. Препараты иммобилизованной фосфоглицераткиназы могут - быть использованы для синтеза 1 3-дифосфоглицерата и для определения активности глицеральдегид-3 - фосфатдегидрогеназы в реакции восстановительного дефосфорилирования 1 3-дифосфоглицерата. [47]
Ческая фиксация полп ( И) и других гомойолимеров йа сефарозе были описана выше. [48]
Аффинный сорбент готовили, как обычно, фиксацией IgG на BrCN-активированной сефарозе. Если на такой сорбент посадить смесь фрагментов нуклеиновых кислот, включающую в себя и ДНК-РНК-гибриды, то ступенчатая элюция 1 М NaCl, 3 М и 5 М NaSCN ( все - в фосфатном буфере) удаляет сначала прочие фрагменты, а затем на последней ступени - истинные ДНК-РНК-гибридные молекулы. [49]
Изучение механизма взаимодействия между гаптоглобином человека, ковалентно связанным с сефарозой 4В, и гемоглобином человека, а также а - и р-цепями, обработанными я-хлормеркурибен-зоатом, проводилось двумя способами: изучалось связывание с помощью хроматографии на колонке и связывание а-цепей в равновесных условиях. Цепи - это цепи, меченные 14С с помощью п-хлормеркури - 14С ] бензойной кислоты. Связывание гемоглобина и а - и р - цепей на иммобилизованном гаптоглобине ( 38 нмоль гаптоглобина на 1 мл сефарозы 4В) показано на рис. 11.3. Добавление возрастающих количеств гемоглобина приводит к плато насыщения при 1 5 моль гемоглобина на 1 моль гаптоглобина. [50]
Для хроматографии рибошмальной РНК и для выделения плазминогена производится лизин - сефароза 4В путем связывания ь-лизина с сефарозой 4В после активации бромщианом. Концентрация связанного лизина составляет 4 - 5 мкмоль на 1 мл набухшего геля. Лизин-сефароза 4В поставляется в виде лио-филизованного порошка в пакетах по 15 г, что эквивалентно 60 мл набухшего геля. Порошок содержит добавки для сохранения способности геля к набуханию. При хранении сухого геля при температурах 8 С не наблюдается никакой заметной потери связанного лиганда даже через 1 год хранения. [51]
Препараты глицеральдегид-3 - фосфатдегидрогеназы из дрожжей, иммобилизованной при степени активации сефарозы 3, 50 и 150 мг BrCN на 1 г геля. [52]
В качестве активированной матрицы для денатурированной ДНК и РНК часто используют BrCN-активированную сефарозу. По-видимому, посадка НК на такую матрицу происходит главным образом по аминогруппам оснований, так как нативная ДНК садится плохо. [53]