Сефароза

Cтраница 2

В тех же условиях BrCN-активированная сефароза теряет более 20 % связанного с ней белка. [16]

Рассмотренный только что для обычной сефарозы, этот вариант элюции, естественно, находит применение и при использовании гидрофобизированной агарозы. В качестве примера процитируем недавно опубликованную работу по мягкой очистке HMG-белка из ядер печени на колонке со-аминобутилагарозы. Этот белок растворим в растворе сульфата аммония вплоть до концентрации, достигающей 70 % от насыщения. [17]

Аффинная хроматография неочищенного куриного овомукоида на колонке с сефарозой, со связанным химотрипсином. [18]

Методом аффинной хроматографии на сефарозе, ковалентно связанной с химотрипсином, Файнштейн [21] выделил куриный ингибитор из неочищенного овомукоида в одну стадию. [19]

В отличие от сефадексов и обычной сефарозы, пористость сшитой сефарозы практически не меняется при переходе от водных растворителей к органическим. При этом она устойчива к их воздействию, что облегчает проведение разнообразных химических реакций замещения с целью получения аффинных сорбентов. Вместе с тем отметим, что активация сефарозы CL бромистым цианом ( для присоединения аффинных лигандов) происходит с вдвое более низкой эффективностью, чем в случае обычной сефарозы. [20]

Степанов и др. [61] солюбилизировали сефарозу с ковалентно связанным моно - М - ДНФ-гексаметилендиамином в 66 % - ной три-фторуксусной кислоте при 100 С. [21]

Эти биогели поставляются, как и сефароза, в виде водной суспензии с добавлением 0 02 % азида натрия. [22]

Проведенное Спенсером физико-химическое исследование четырех партий сефарозы не выявило других причин различия их хромато-графических характеристик, кроме трудно объяснимой корреляции степени адсорбционного задержания тРНК с уменьшением среднего диаметра гранул. К сожалению, партии сефарозы последних лет выпуска хуже задерживают тРНК в ходе миграции, что приводит к менее эффективному ее фракционированию. [23]

Использование в качестве основы химически и термически стойкой сефарозы CL - 4B позволяет присоединить к матрице указанные в наименованиях заместители прочными эфирными связями. Концентрация заместителей примерно вдвое выше, чем у продукции фирмы Miles, соответственно увеличивается и емкость сорбента. [24]

Слегка подсушенную на фильтре током воздуха сефарозу взвешивают и заливают 1 М КзРС4 ( рН 11): 1 мл на 1 г сефарозы. К полученной суспензии, предварительно охлажденной до 4 С, добавляют при постоянном перемешивании раствор BrCN в воде ( 5 %) или в диоксане ( 20 %) из расчета 5 мг BrCN на 1 г сефарозы. [25]

В настоящее время доступны три типа: сефароза 6В с концентрацией агарозы - 6 % ( размер набухших гранул 40 - 210 мкм), предназначенная для фракционирования соединений с мол. Для аффинной хроматографии наиболее широко применяется сефароза 4В, в то время как с помощью сефарозы 2В в основном проводится выделение особенно больших молекул. [26]

Концентрацию последнего выбирают в зависимости от количеств сефарозы и бромциана. Куатреказас [12] рекомендует использовать для 5 - 10 мл набухшей сефарозы и 1 - 3 г добавляемого бромциана 2 М КаОН, а для 100 - 300 мл набухшей сефарозы и 20 - 30 г бромциана - 8 М NaOH. Температура не должна превышать 20 С, если необходимо охлаждение, добавляют лед. Реакция заканчивается за 8 - 12 мин После быстрого перенесения суспензии в воронку Бюхнера при постоянном отсасывании активированную сефарозу промывают охлажденным буферным раствором того же состава, который используется при последующей привязке аффинного лиганда. Объем буферного раствора для промывания должен быть в 10 - 15 раз больше объема раствора, в котором проводилась активация сефарозы. Промытая сефароза как можно быстрее суспендируется в равном объеме раствора аффинного лиганда. Согласно Куатреказасу [12], промывка, добавление раствора аффинного лиганда и смешивание не должны занимать более 90 с. Даже при низкой температуре активированная сефароза нестабильна. [27]

Реакцию ведут в диоксане, в который сефарозу переводят последовательными промывками водой, смесями диоксан-вода в соотношении 3: 7 и 7: 3, а затем чистым диоксаном. [28]

Однако обнаружено, что хроматография химотрипсина на незамещенной сефарозе не дает достаточных доказательств отсутствия неспецифической сорбции. Напротив, Хофсти [12] показал, что сефароза с иммобилизованным метиловым эфиром е-амино-капронил-о - триптофаном сорбирует, например, сывороточный альбумин или у-глобулин полностью неспецифически. [29]

Зависимость концентрации активных циановых эфиров в сефарозе 4В от количества вносимого в реакцию BrCN [ Kohn, Wilchek, 1982 ]. [30]

Страницы: 1 2 3 4