Cтраница 3
Коэффициент распределения очень сильно зависит от температуры. В большинстве случаев повышение температуры на 30 приводит к уменьшению коэффициента распределения в два раза, и, таким образом, вдвое увеличивает скорость перемещения компонента. [31]
Аликвотную часть ( 10 - 25 мкл) этого раствора, содержащую 0 8 - 1 5 мкг нуклеотидов в 1 мкл, наносят на пластинку с ПЭИ-целлюлозой. Скорость перемещения компонентов щелочного гидролизата РНК уменьшается в следующем порядке: нуклеозиды ( 2 / - 3 - ЦМФ 2 - АМФ3 - АМФ ( 2 - 3 - УМФ) ( 2 - 3 - ГМФ) дифосфаты. Тот же порядок элюирования сохраняется для 5 -изомеров и соответствующих производных, содержащих дезоксирибозу. Особенно четко разделяются компоненты щелочных гидролизатов РНК при восходящей непрерывной тонкослойной хроматографии на ПЭИ-целлюлозе. Для этой цели используют пластинки длиной 17 см, к верхнему краю которых прикреплен фитиль длиной 10 см из бумаги Ватман 3 ММ. Общая продолжительность хроматографии составляет 4 час. Количественное определение веществ на пластинках производят прямым методом ( см. разд. [32]
В настоящее время, с расширением применения колонн Диаметром 100 ын и более, препаративная газовая хроматография превращается в полупромышленный метод получения чистых веществ. Известно, что с увеличением диаметра колона их эффективность уменьшается. Основной причиной такого уменьшения считается неравенство скоростей перемещения компонента на разных участках поперечного сечения колонны. Это неравенство скоростей наблюдалось экспериментально в ряде работ, однако, характер профиля скоростей и причины его искривления до настоящего времени не выяснены. [33]
В настоящее время общепризнано, что основным фактором снижения эффективности является профиль скоростей перемещения компонента по сечению колонны. Причины возникновения профиля скоростей в настоящее время точно не установлены. Наиболее логично предположение, что разность в скорости перемещения компонента связана с разностью в скорости потока газа-носителя в различных точках поперечного сечения колонны. [34]
При проведении хроматографического разделения анализируемую смесь вводят импульсно в поток подвижной фазы, фильтрующейся через слой сорбента, заполняющий колонку или нанесенный на пластину. Компоненты смеси потоком подвижной фазы перемещаются по колонке или пластине, причем в зависимости от сорбируемости они двигаются с разными скоростями и в результате разделяются. Поэтому ключевым вопросом является установление закономерностей, которым подчиняется скорость перемещения компонента. [35]
Неясно, однако, как именно сопротивление массообмену влияет на скорость перемещения компонента. [36]
При пропускании анализируемого раствора электролита через ионообменник в результате гетерогенной химической реакции происходит обратимый стехиометрический эквивалентный обмен ионов раствора на ионы того же знака, входящие в состав ионообменника. Разделение ионов обусловлено их различным сродством к ионообменнику и происходит за счет различия скоростей перемещения компонентов по колонке в соответствии с их значениями коэффициентов распределения. [37]
Наиболее обоснованной представляется следующая картина образования профиля скоростей компонента. При уплотнении насадки ее слои, расположенные на разных расстояниях от оси колонны, уплотняются неравномерно: сильнее уплотняется периферийный, слабее - центральный слой. Из-за неравномерной упаковки частиц возникает выпуклый по ходу потока профиль скоростей газа-носителя и, как следствие, подобный ему прслиль скоростей перемещения компонента. Некоторая неравномерность распределения частиц насадки но размерам, особенно заметна я после вибрации, делает профиль скоростей более плоский. Не исключено, что на профиль скоростей компонента влияет не только скорость газа-нослтеля, цр и ряд других эффектов, связанных с сорбцией и ыассообианоы. [38]
На полоску фильтровальной бумаги, увлажненной буферным раствором, наносят в форме поперечной черточки или пятна исследуемый биоколлоидный раствор. Полоску помещают в горизонтальном положении в закрытое пространство, а концы ее погружают в буферный раствор, где находятся электроды. После подключения источника электродвижущей силы электрическое поле вызывает движение компонентов, находящихся в черточке или пятне, вдоль полоски. Скорость перемещения компонентов зависит от их электро-форетической подвижности. Через некоторое время электрофорез прекращают, бумагу высушивают и погружают в раствор красителя, который на биоколлоиде адсорбируется сильнее, чем на бумаге. В последнее время вместо бумаги используют гелеобразные среды ( агар-агар, желатин), которые дают более резко очерченные зоны. Кроме того, было установлено ( Шелудко, Константинов, Цветанов, 1959 г.), что, например, в - желатине не только сама электрофоретическая подвижность некоторых красителей меньше, чем в воде или водных растворах, но и соотношение между подвижностями компонентов в этом случае совсем иное. Эти особенности метода еще не до конца изучены. Поскольку рассматриваемый метод имеет важное практическое значение, различные проблемы создаваемой в настоящее время теории электрофореза в пористых и гелеобразных средах и разнообразные методы его использования являются предметом многих научных трудов. [39]
Описание движения компонентов разделяемой смеси вдоль неподвижной фазы является основной задачей теории хроматографии. Это движение происходит с определенной скоростью, и поэтому равновесие между фазами не достигается. Однако при соответствующих условиях хроматографические процессы могут приближаться к равновесным. Анализ равновесного процесса позволяет связать скорость перемещения компонента ьдоль неподвижной фазы со скоростью потока элюента и изменением величины сорбции. [40]
Поскольку чувствительность детекторов, используемых в жидкостной хроматографии, ограниченна, часто задача, стоящая перед хроматографистом, состоит в том, чтобы определить микропримеси определенного компонента в смеси. Если даже концентрация вещества в анализируемой пробе еще достаточно велика для прямого определения, то после разделения из-за разбавления в процессе хро-матографического элюирования она становится намного меньше. Поэтому, чтобы все же можно было проводить определение, следует увеличить вводимую пробу. Это не вызывает осложнений, особенно если работа ведется с очень разбавленными растворами, так как колонку при этом не перегружают. Существует правило, что в колонку можно вводить, не вызывая заметного дополнительного размывания полосы, пробу, объем которой не превышает примерно 5 % объема колонки. Объем пробы можно увеличить еще больше, если значение k определяемого вещества приблизительно больше 2 и не нужно определять вещества, элюируемые перед ним. В неподвижной фазе скорость перемещения компонентов вдоль колонки меньше скорости элюента, поэтому при k 2 проба концентрируется и перемещается по колонке в виде более узкой, чем это отвечает объему введенной пробы, зоны. [41]