Скорость - элюция
Cтраница 3
Хроматограф Милихром, колонка 2 80, Separon SGX RP-S С18, 7 мкм, подвижная фаза: спирт метиловый-вода ( 50: 50), длина волны детектирования 204 нм, скорость элюции 100 мкл / мин. [31]
Важными требованиями, предъявляемыми к детектору, являются его нечувствительность к изменению скорости потока, состава подвижной фазы и температуры, что важно при хромаго-графическом анализе с применением градиента растворителя, программировании температуры или скорости элюции. [32]
В том же номере журнала описано разделение нативных белков с молекулярными массами в интервале 13 - 340 тыс. Дальтон на колонке Varian MicroPak TSK GEL 3000 SW размером 0 75 х 30 см. При среднем диаметре гранул 10 мкм скорость элюции здесь также составляла около 140 мл / см2 - ч, так что все поставленные выше вопросы относятся и к этой работе. [33]
Тарр недавно описал изократическое фракционирование ФТГ-АК на колонке Ultrasphere ODS ( 0 46 X 25 см) 48 % - ным раствором CH3CN в 0 065 М ацетате аммония ( рН 4 54) при температуре 55 в режиме изменения скорости элюции в ходе фракционирования от 1 до 2 мл / мин. [34]
 |
Хроматограмма полидисперсного полимера F ( V как суперпозиция пиков отдельных полимергомологов G ( V. [35] |
Функции распределения по параметрам удерживания q ( V) и q ( t) связаны соотношениями: q ( V) dVq ( t) dt или q ( t) - q ( V) ( dV / dt), где dV / dt - v-объемная скорость элюции. [36]
При составлении первого уравнения движения зоны предполагают, что в начальный момент времени t 0 на колонку длиной L вносят в виде очень тонкого слоя конечную массу вещества М и немедленно начинают элюцию так, что подвижная фаза перемещается вдоль колонки с линейной скоростью и, которую условимся называть скоростью элюции. Далее рассматривают бесконечно тонкий слой внутри зоны в момент t, когда максимум ее находится на расстоянии х от начала колонки. Для этого слоя составляют дифференциальное уравнение баланса, имея в виду, что скорость изменения количества вещества в неподвижной и подвижной фазах слоя ( суммарно) обусловлена разностью потока вещества на границах слоя в обеих фазах с учетом диффузии. [37]
Например, легко видеть, что с увеличением диаметра гранул зона расширяется как за счет неоднородности тока жидкости, так и особенно за счет неравновесности распределения молекул вещества по объемам подвижной и неподвижной фаз. Скорость элюции ( и) также влияет двояким образом. С ее увеличением вклад продольной диффузии в расширение зоны уменьшается, зато сильнее сказываются все неравновесности распределения. Наконец, все факторы без исключения увеличивают дисперсию зоны пропорционально длине колонки L. Отсюда следует, что движение хроматографической зоны вдоль колонки в неидеальных условиях связано с непрерывным расширением зоны. Это должно нас насторожить в отношении целесообразности увеличения длины колонки. [38]
Для препаративной ГПХ была использована [68] система из 8 хроматографи-ческих колонок ( 60 X 2 1 см), заполненных ( л-с тирогелем ( dp - 10 мкм) с проницаемостью 105 103 и 103 нм в соотношении 61: 18: 21 соответственно. Скорость элюции составляет 8 5 см3 / мин при давлении 5 МПа. Эффективность препаративной ГПХ увеличивается с уменьшением концентрации пробы. [39]
По мере выхода раствора NaCl из смесителя в него из резервуара подается равное количество раствора высокой концентрации, благодаря чему происходит линейное увеличение концентрации элюата. Скорость элюции составляет 0 6 - 1 мл в 1 минуту. Объем проб равен 4 мл. [40]
Колонка была термостатирована при 37 0 2; давление - примерно 70 атм. Указанные значения скорости элюции, температуры, рН и ионной силы должны выдерживаться строго. Так, при увеличении скорости не разделяются ФТГ-производные Phe и Не. При рН 5 1 задерживаются кислые аминокислоты, а при больших рН не разделяются ФТГ-карбоксиметилцистеин ( цистеин, как обычно, во избежание окисления алкилировали) и ФТГ-Gly. При изменении концентрации ацетата аммония сдвигаются пики ФТГ-Arg и ФТГ-His. Разделение ФТГ-АК, показанное на рис. 87, можно считать достаточно хорошим. [41]
Хорнштейн ( Hornstein, 1957 a) производит отщепление хлора пестицидов, содержащихся в ацетоновом экстракте, пропуская экстракт через колонку с цинком. Описаны параметры колонки и скорость элюции. На выходе собирают разные фракции, содержащие хлор. Время выхода хлора определяется строением пестицида, что обеспечивает некоторую специфичность метода. Метод требует проведения холостого анализа и вычитания полученных результатов из определения. Величины отщепляемого хлора из разных хлорорга-ничеоких пестицидов, определяемых этим методом, сведены в таблицу и используются для конечного расчета. В сборнике под редакцией Ю. Д. Лебедева и А. И. Штенберга ( 1961) представлен метод анализа 50 г гомогената любых тканей. После экстракции и очистки пестицид разрушают хромовой смесью, выделяющийся хлор определяют титриметрически или колориметрически. Первый способ обеспечивает чувствительность 7 мкг по хлору в пробе, второй - 1 мкг в 10 мл колориметрируемого раствора. [42]
Отбор проб проводят фракционным коллектором. Объем фракций равен 5 мл, скорость элюции 0 8 мл в минуту. Оптическая плотность каждой фракции измеряется на спектрофотометре СФ-4 при 260 ммк ( область максимального поглощения нуклеотидов) и на основании полученных данных строят кривую элюции. [43]
Что касается самого хроматографического процесса, то контроль за ним сводится к поддержанию постоянства выбранной скорости элюции и сбору фракций. Соображения о выборе размеров колонки, объема препарата, типа элюента и скорости элюции даны в следующем разделе. Здесь, пожалуй, имеет смысл только упомянуть о технически своеобразном микроварианте гель-фильтрации с использованием центрифугирования. Наконечник эппендорфов-ской пипетки [ Gorray, Quay, 1977J или баллончик пластикового шприца на 1 мл [ Krauth, Werner, 1979 ] заполняют суспензией се-фадекса G-25, закрыв отверстие кусочком стеклянной ваты. Эту колонку тем или иным способом закрепляют в центрифужной микропробирке ( или пробирке) так, чтобы кончик не доставал дна. Центрифугированием в роторе с откидными стаканчиками при ускорении lOOOg в течение 5 - 10 мин удаляют буфер из свободного объема между гранулами. [44]
Выводы теории подтверждаются хроматографическими экспериментами. В [106 -108] показано, что V % при эксклюзионной хроматографии не зависит от скорости элюции v в интервале скоростей 1 v 10 мл / мин и молекулярных масс 102 М 10е с использованием различных макропористых стекол со средними диаметрами пор от 200 А до 2500 А. [45]
Страницы: 1 2 3 4