Идентификация - аминокислота
Cтраница 1
Идентификация аминокислот и пептидов во фракциях. Нингидрин реагирует со всеми аминокислотами, имеющими а - МН2 - группу, давая фиолетовое окрашивание, за исключением пролина или оксипролина, в реакции с которыми нингидрин дает желтое окрашивание. Некоторые примеси ( медь, кадмий и др.) могут влиять на цвет пятен. [1]
 |
Камеры для хроматографии нисходящей ( о и восходящей ( б. [2] |
Идентификация аминокислот на хроматограммах проводится путем нанесения на ту же хроматограмму свидетелей - растворов отдельных аминокислот. [3]
Идентификация аминокислот, присутствующих в активных центрах ферментов, разумеется, очень важна для понимания главных особенностей механизма ферментативных реакций. Существует ряд методов, с помощью которых можно идентифицировать хотя бы некоторые из аминокислотных остатков, участвующих в построении активного центра. Наиболее прямой метод состоит в присоединении к какому-нибудь аминокислотному остатку, входящему в состав активного центра, ковалентной метки, которая оставалась бы устойчивой в условиях деградации полипептидных цепей. С точки зрения такой возможности все ферменты можно разделить на два класса: в один из них входят ферменты, образующие в ходе каталитического процесса ковалентно связанные промежуточные фермент-субстратные производные, а в другой - ферменты, которые таких производных не образуют. Для ферментов первого класса проблема введения специфической метки в активный центр ( а не просто неспецифического введения метки в белок) часто решается путем использования в качестве носителей метки Либо обычных субстратов этих ферментов, либо соединений, структурно родственных субстрату. [4]
Идентификацию аминокислот проводят с помощью свидетелей и на основании известных значений Rf отдельных аминокислот. При анализе дрожжей в гидролизатах белка находят почти все аминокислоты. На хроматограммах таких многокомпонентных смесей пятна аминокислот расположены очень близко, поэтому для их идентификации делают параллельное хроматографирование искусственных смесей аминокислот. [5]
Для идентификации аминокислот очень удобны тонкослойная хроматография и хроматография на бумаге ( см. литературу в гл. [6]
Для идентификации аминокислот пригодны оба сорта бумаги, для количественного анализа лишь ленинградская медленная, вторая дает диффузные и трудно эл юируемые пятна аминокислот. [7]
После идентификации аминокислоты в фенилгидантоине ( лучше всего с помощью ГЖХ) операцию повторяют до определения всей последовательности аминокислот. [8]
Для идентификации аминокислот используется тот же способ и те же растворители, которые были рекомендованы для определения Сахаров ( см. стр. При этом, помимо определения значения Rf, одновременно для различения аминокислот используют характерную окраску пятен различных аминокислот. [9]
Для идентификации аминокислот в исследуемом гидролизате наряду с опытными пробами ( или предварительно, до анализа опытных проб) на хроматограмму наносят растворы аминокислот-свидетелей. После установления местоположения пятен отдельных аминокислот-свидетелей последние в дальнейшем на хроматограмму можно наносить в составе смесей. Смеси должны иметь известный состав и хорошо разделяться при данных условиях хроматографирования. [10]
Для идентификации аминокислот используется тот же способ и те же растворители, которые были рекомендованы для определения Сахаров ( см. стр. При этом, помимо определения значения Rf, одновременно для различения аминокислот используют характерную окраску пятен различных аминокислот. [11]
Для идентификации аминокислот наиболее широко используются их ФТГ-производные. Как показывают данные этой работы, разрешающая способность колонки сильно зависит от рН и ионной силы элюента, скорости потока, а также от температуры предварительной и основной колонок. По этой причине часто трудно установить точное положение пиков, отвечающих ФТГ-производным основных и кислых аминокислот. Даже незначительное изменение рН сильно сказывается на времени удерживания ФТГ-Asp и ФТГ-Glu, а ФТГ-His и ФТГ-Arg могут при этом элюироваться одновременно. С увеличением рН от 3 5 до 6 0 уменьшается время удерживания производных кислых и основных аминокислот, тогда как увеличение концентрации ацетат-ионов при постоянном значении рН приводит к уменьшению времени удерживания только ФТГ-производных основных аминокислот. Установлено также, что оптимальное разрешение пиков, отвечающих ФТГ-производным метионина, вали-на, лизина и изолейцина, достигается при скорости потока 1 3 мл / мин. [12]
Для успешной идентификации аминокислот необходимо, чтобы все они обладали характерным свойством или вступали в реакцию, продукт которой легко было бы обнаружить. Чаще всего используется способность аминокислот реагировать с нингидрином с образованием продуктов характерного синего цвета. В настоящее время разделение и идентификация аминокислот полностью автоматизированы. [13]
Применяется для идентификации N-кон-цевых аминокислот в пептидах. [14]
Новым методом идентификации аминокислот и их количественного определения является также спектрофотометрах в инфракрасном свете. [15]
Страницы: 1 2 3 4