Идентификация - аминокислота
Cтраница 3
Относительно неустойчивое производное 2-анилино - 5-ти-азолинона непригодно для идентификации аминокислоты. [31]
Рюэман) и в настоящее время остается важнейшим способом идентификации аминокислот на хрома-тограммах. Химизм нингидриновой реакции до сих пор подробно объяснить не удается. На первой стадии основной реакцией является реакция Штрек-кора - распад аминокислот с образованием углекислого газа, аммиака и альдегида, содержащего на один атом углерода меньше, чем в исходном аминокислоте. [32]
Динитрофенильпые производные аминокислот находят широкое применение в качестве свидетелей для идентификации аминокислот при хроматографическом анализе гидролизатов белков и пептидов. Они представляют собой желтые кристаллические вещества, обладающие большой светочувствительностью. Хранить их следует в темноте или в посуде из оранжевого стекла. [33]
Полученные N-ацилсоединения обычно хорошо кристаллизуются и подходят для характеристики н идентификации аминокислот. Часто N-ацильные остатки можно легко и быстро отщепить снова, так что они могут служить временной защитой аминогруппы ( разд. Фторзамещенные N-ациламннокислоты служат для приготовления легколетучих производных для газовой хроматографии, N-ацетил - и N-хлорацетиламинокислоты для ферментативного расщепления DL-соединений. Аминокислоты, ацилированные остатками природных жирных кислот, как, например, N-лауроил - и N-стеарилглутаминовая кислоты, приобретают большое значение в качестве поверхностно-активных веществ, не загрязняющих окружаюшую среду. [34]
Сочетание пиролитической газовой хроматографии с масс-спек-трометриен, вероятно, позволит решить задачу идентификации аминокислот и простейших пептидов без применения стандартов непосредственно по тем фрагментам, на которые распадается исходная молекула в процессе термодеструкцпп. [35]
Метод бумажной хроматографии ( БХ) был открыт в 1943 г. как метод разделения и идентификации аминокислот при их малых количествах. [36]
Количества их так малы, что даже сто тысяч гипоталамусов не дадут столько материала, сколько нужно для идентификации аминокислот. Пока что обнаруженные аминокислоты истолковываются как загрязнения. Чтобы применять эти вещества на практике, необходимо их синтезировать; только тогда их можно будет иметь в распоряжении в достаточных количествах. [37]
Новая модель TSM ( Technicon Seguential Multi-Sample Amino Acid Analyzer) представляет собой автоматизированный прибор, презназначенный для разделения, детектирования и идентификации аминокислот в растительных и животных тканях и жидкостях. Время анализа белковых гидролизатов составляет здесь 15 мин, а смеси аминокислот из физиологических жидкостей и экстрактов тканей - 5 ч 30 мин. После ручной зарядки восьми патронов анализ 40 образцов проводят в автоматическом режиме. Анализ осуществляется по двухколоночной схеме; по чувствительности прибор идентичен модели NC-2. Он укомплектован множеством колонок, смол и других принадлежностей. [38]
Однако полосы поглощения в этом интервале частот наблюдаются также у многих амидов и ароматических аминов, так что они не могут рассматриваться как характеристические при идентификации аминокислот. [39]
Кулонен [1], учитывая упомянутые в предыдущем разделе недостатки и затруднения при хроматографировании ДНФГ, применил метод, предусматривающий предварительное восстановление ДНФГ амальгамой алюминия в аминокислоты с последующей идентификацией последних методом хроматографии на бумаге. Для идентификации аминокислот, образовавшихся в результате восстановления ДНФГ, пользуются методами, приведенными в главе об аминокислотах ( стр. Для этой цели Виртанен и сотрудники [1, 2] рекомендуют двумерное хроматографирование с применением в качестве первого растворителя системы н-бута-нол - уксусная кислота - вода в соотношении 4: 1: 5, а в качестве второго - фенола, насыщенного водой. [40]
Для идентификации замещенных аминокислот решающим фактором является то, что продукты деградации различаются по своим свойствам. Окислительная деградация в щелочном растворе гипохлорита [55] приводит к образованию альдегида, в молекуле которого на один углеродный атом меньше, чем в исходном соединении. Однако изучение этой реакции для применения в ГХ [4 ] выявило некоторые моменты, говорящие об ограниченности ее использования в данных целях. [41]
 |
Разделение ДАБТГ-аминокис-лот двумерной тонкослойной хроматографией на полиамиде. [42] |
Достоинствами метода являются: высокая чувствительность ( 30 - 50 пмоль), скорость ( на один анализ требуется менее 10 мин), хорошая разрешающая способность и возможность количественного определения ФТГ. Часто для идентификации аминокислот, отщепляемых при деградации пептидов по методу Эдмана, используются также масс-спектрометрия и аминокислотный анализ. В последнем случае анализируемый ФТГ вначале гидролизуется с помощью HI до свободной аминокислоты. [43]
Аминокислоты открывают с помощью соединений, образующих с ними окрашенные или флуоресцирующие продукты. Наиболее широкое распространение для идентификации аминокислот получил нингидрин. [44]
При исследовании структуры белков используются эти и другие методы расщепления. Предложен ряд технических приемов для идентификации конечных аминокислот. Один из них широко применяется для идентификации аминокислот, содержащих концевую аминогруппу. Согласно этому методу, проводят реакцию полипептида с 2 4-динитрофторбензолом, при этом свободная аминогруппа превращается в 2 4-динитрофенил-производное ( разд. Последовательный гидролиз полипептидов дает обычные аминокислоты, за исключением конечной N-ариламинокислоты, которую можно отделить и идентифицировать хроматографически. [45]
Страницы: 1 2 3 4