Cтраница 3
Измерение сложных спектров по точкам требует много времени, и большинство спектрофлуориметров имеет приспособление для автоматической записи спектра. Если источник света стабилизирован, то однолучевая схема дает вполне удовлетворительные результаты. В продаже имеется ряд усилителей постоянного тока, которые обычно имеют несколько диапазонов чувствительности и регулировку постоянной времени. Если необходимо получить полное разрешение, спектр нужно записывать более медленно. [31]
![]() |
Сравнение чувствительности приборов. [32] |
Чувствительность прибора зависит от следующих факторов, уже рассмотренных при обсуждении характеристики спектрофлуориметра ( гл. [33]
Приборы, позволяющие снимать ( регистрировать) спектр флуоресценции, получили название спектрофлуориметров. [34]
Интенсивности флуоресценции двух растворов в одинаковых условиях определяют как функцию частоты при помощи спектрофлуориметра, градуировочную кривую для которого получают при использовании лампы накаливания известной цветовой температуры. [35]
Солевые эффекты 25, 163, 167 Сольватация ионов, см. Обмен между растворителем и сольватированными ионами Спектрофлуориметры 157 Спинового эха метод в ЯМР 232 Спин электрона 199 и ел. [36]
Фирма Америкэн инструмент компани ( США) [58] выпускает сканирующее устройство для ТСХ, используемое в комплекте со спектрофлуориметром для измерения спектров поглощения и флуоресценции. Для измерения поглощения возбуждающее излучение через монохрома-тор подводят к одной из сторон ТСХ-пластинки, а с другой в месте падения луча света укреплен световод из волоконной оптики. По световоду свет подают в монохро-матор той же длины волны, что и излучающий, для определения параметров поглощения. Для измерения интенсивности возбужденной флуоресценции поверхность сорбента ориентируют под углом 90 к направлению падения возбуждающего луча, а световод - под углом 45 так, чтобы флуоресцентное излучение через монохроматор попадало на фотоумножитель. [37]
Геометрическое расположение пучка возбуждающего света и выбор направления наблюдения флуоресценции по отношению к образцу остаются одними из наиболее спорных пунктов при изготовлении спектрофлуориметров. Отчасти это обусловлено разными назначениями приборов в каждом конкретном случае, отчасти - различной чувствительностью используемых приборов, а также и тем, что многие путают понятия тушения и эффекта внутреннего фильтра. [38]
Преимущества этого метода в том, что хинин характеризуется высокой интенсивностью флуоресценции и стабилен в растворах H2SO4; хинин часто применяют в качестве стандарта для калибровки спектрофлуориметров. [39]
МУТМАЦ ( 100 мкл 0 2 мМ водного раствора) добавляют к 2 мл 0 1 М боратного буфера ( рН 7 5), помещенных в кювету спектрофлуориметра, и записывают базовую линию. Суспензию ( 50 - 200 мкл) тщательно размешанного сефа-декса со связанным химотрипсином вносят при перемешивании в кювету, перемешивание продолжают еще 30 с. Записывают кривую флуоресценции освобождающегося 4-метилумбеллиферона; она достигает постоянного значения через 1 мин. Отсюда рассчитывают концентрацию активных центров. Вычисленная концентрация активного фермента не зависит от объема суспензии и количества МУТМАЦ и становится постоянной после перемешивания в течение 15 с-1 мин. [40]
К 3 мл 3 4 - 10 - М раствора указанного реагента в диметилсульфоксиде прибавляют 0 1 мл анализируемого раствора и измеряют интенсивность флуоресценции при 500 нм на спектрофлуориметре, возбуждая раствор светом с длиной волны 440 нм. [41]
![]() |
Оптическая схема флуориметра с фронтальным освещением. [42] |
Однако даже эти, далекие от совершенства приборы выпускаются малыми сериями, что сдерживает внедрение флуоресцентных методов в практику. Спектрофлуориметры в настоящее время почти не выпускаются, их собирают из стандартных и кустарно изготавливаемых блоков, что очень сложно даже хорошо оснащенным лабораториям. [43]
![]() |
Схема уровней энергий ионов р. з. э. в хлоридах. [44] |
Согласно результатам, приведенным в работе [1], ионы Се ( III) дают в водных растворах флуоресценцию сине-фиолетового цвета. Используя спектрофлуориметр при возбуждении светом с длиной волны 254 ммк и при регистрации флуоресценции с длиной 350 ммк, можно обнаружить Се ( III) в растворе 0 4 М H2SO4 еще при концентрации его 10 - 6 г-ион / л или 0 15 мкг / мл. [45]