Спектрофлуориметр

Cтраница 4

Измерение фосфоресценции обычно проводят в твердой фазе при температуре жидкого азота, поскольку в жидких растворах фосфоресценция интенсивно тушится ничтожными количествами примесей. В большинстве современных спектрофлуориметров это достигается тем, что при измерении спектров фосфоресценции вокруг образца вращается полый цилиндрический стакан, имеющий вырезы в баковой стенке. При вращении стакана вокруг его оси образец освещается возбуждающим светом, проходящим через вырезы, и долгоживу-щая люминесценция регистрируется через те же самые вырезы. [46]

Измерение фосфоресценции обычно проводят в твердой фазе при температуре жидкого азота, поскольку в жидких растворах фосфоресценция интенсивно тушится ничтожными количествами примесей. В большинстве современных спектрофлуориметров это достигается тем, что при измерении спектров фосфоресценции вокруг образца вращается полый цилиндрический стакан, имеющий вырезы в боковой стенке. При вращении стакана вокруг его оси образец освещается возбуждающим светом, проходящим через вырезы, и дол-гоживущая люминесценция регистрируется через те же самые вырезы. [47]

Это было сделано при помощи спектрофлуориметра и двух вращающихся секторов, один из которых служил для прерывания пучка возбуждающего света, другой - для прерывания пучка излученного света. Когда оба прерывателя находятся в одинаковой фазе, измеренная интенсивность обусловлена фосфоресценцией плюс флуоресценцией; если они в разных фазах - то только фосфоресценцией. [48]

Распределение фитопланктона и растворенного органического вещества но глубине, полученное при зондировании проб морской воды. [49]

Рассмотренный метод лазерной флуориметрии может быть применен не только к водной среде, но и к экстрактам. Там же показано, что, используя лазерный спектрофлуориметр, можно вести измерения концентраций хлорофилла а и феофитина в исходных пробах природной воды и в экстрактах с погрешностью меньше 20 % в районах с крайне низким содержанием фитопланктона. [50]

Монохроматоры всех систем конструируются по следующей схеме ( рис. 45): входная щель W регулируемой ширины, коллиматор MI ( это может быть зеркало или линза), диспергирующий элемент G ( дифракционная решетка или призма), зеркало или линза Мч для фокусирования диспергированного света и выходная щель W % регулируемой ширины. Будем для простоты предполагать, что высота щелей W и W2 одинакова и фокусные расстояния зеркал MI и М2 тоже одинаковы; для монохроматоров, используемых в спектрофлуориметре, это условие обычно соблюдается. Свет от источника S проходит через линзу L к входной щели W монохроматора. Пучок света, выходящий из щели Wi, делается параллельным с помощью коллиматора Mi и проходит к диспергирующему элементу G. Свет различных длин волн выходит из G под слегка различными углами, и диспергированный свет фокусируется зеркалом или линзой М2 на плоскость VR так, что каждая длина волны дает изображение входной щели в некоторой точке плоскости VR. [51]

На принципе люминесценции основан и спектрофлуориметри-ческий метод. Он использует ультрафиолетовую область свечения с длиной волны 340 - 370 нм и имеет более высокую чувствительность. По этому принципу работают все спектрофлуориметры. С помощью их получают спектры флуоресценции при различной длине волны. [52]

Для сравнения замедленной флуоресценции активационного и аиниги-ляционного типа проводят измерения спектров и кинетики замедленной флуоресценции эозина и антрацена в глицерине или полиэтиленгликоле. Для измерения спектров замедленной флуоресцейции используют спектрофлуориметр с вращающимся цилиндром с прорезями. Определяют зависимость интенсивности замедленной флуоресценции от интенсивности возбуждающего света, используя градуированные ослабительные сетки. [53]

Для сравнения замедленной флуоресценции активационного и анниги-ляционного типа проводят измерения спектров и кинетики замедленной флуоресценции эозина и антрацена в глицерине или полиэтиленгликоле. Для измерения спектров замедленной флуоресценции используют спектрофлуориметр с вращающимся цилиндром с прорезями. Определяют зависимость интенсивности замедленной флуоресценции от интенсивности возбуждающего света, используя градуированные ослабительные сетки. [54]

Показатель абсолютной чувствительности флуоресценции используется также для предсказания возможной чувствительности определенного прибора. В этом случае необходимо принять во внимание характеристики прибора. Предположим, например, что чувствительность спектрофлуориметра для обнаружения бисульфата хинина с возбуждением светом 366 нм известна и нужно определить чувствительность в случае тионина. Показатель абсолютной чувствительности тионина ( табл. 47, столбец 8) составляет 0 038 ( 0 00028 / 0 0073) от показателя бисульфата хинина. Последний показывает, что чувствительность в максимуме флуоресценции тионина составляет приблизительно 0 6 от чувствительности в максимуме флуоресценции бисульфата хинина. [55]

После заполнения колонку в течение 1 ч промывают бензолом со скоростью подачи 2 5 мл / мин. Рабочая скорость подачи 0 1 мл / мин. Выход колонки соединяют с проточной ячейкой спектрофлуориметра Farrand. Поскольку в большинстве случаев интенсивность флуоресценции слишком велика, то в систему вводят насос для отбора части элюата. Избыток элюата отбрасывают или же анализируют методом тонкослойной хроматографии. Можно, конечно, работать при пониженной чувствительности прибора или же непрерывно разбавлять элюат ацетоном или метилцеллозольвом. Спектрофлуори-метр работает в следующем режиме: 2iexcit 340 нм, Яепт 500 нм. [56]

Схема спектрофосфориметра. [57]

Сдвиг по фазе между двумя дисками остается постоянным за счет того, что оба мотора питаются от одного источника переменного тока с частотой 50 Гц. Поворачивая корпус одного из моторов вокруг оси вращения, устанавливают прерыватели в фазе или противофазе, не останавливая их, и сразу же последовательно регистрируют долгоживущую люминесценцию и сумму обычной и долгоживущей люминесценции. Это расположение имеет то преимущество, что прибор можно использовать как спектрофлуориметр, установив прерыватели в фазе. [58]

Некоторые спектрофлуориметры могут быть использованы также в системах фильтр / фильтр и много-хроматор / фильтр с применением возбуждающего излучения так называемого нулевого порядка и подходящих светофильтров. Излучение нулевого порядка получается путем поворота спектральной решетки на такой угол, при котором решетка начинает работать как простое зеркало. В спектрофлуоримет-рическйх детекторах, специально предназначенных для ВЭЖХ, ширину спектральных линий устанавливают большей, чем в спектрофлуориметрах общего назначения ( обычно 10 - 20 им), чтобы повысить чувствительность анализа. [59]

Страницы: 1 2 3 4