Терминация - транскрипция
Cтраница 2
Аутентичные гетерологичные белки были получены и с помощью других дрожжевых систем. Например, кДНК а - и р-цепей гемоглобина А человека были встроены между промотором ( МОХр) и сигналом терминации транскрипции ( MOXf) гена метанолоксидазы Hansenula polymorpha и помещены друг за другом в экспрессирующий вектор. [17]
Культуру клеток насекомого, трансфициро-ванную ДНК AcMNPV, трансфицируют затем транспортным вектором, несущим клонированный ген. В некоторых дважды трансфицирован-ных клетках происходит двойной кроссинговер, в результате которого клонированный ген вместе с промотором и сигналом терминации транскрипции гена полиэдрина встраивается в ДНК AcMNPV ( рис. 7.9), замещая ген полиэдрина. Вирионы, не содержащие этого гена, образуют зоны клеточного лизиса, из которых можно выделить рекомбинантный бакуловирус. [19]
Особенность участков генов 5S РНК и тРНК, узнаваемых фак торами транскрипции и РНК-полимеразой и обеспечивающих инин диацию транскрипции, состоит в том, что они локализованы непо-1 средственно в транскрибируемом районе ( или районах) гена. Размеры транскрипционного комплекса, включающего субъедини-щы полимеразы, достаточно велики, чтобы взаимодействовать с внутренними районами небольшого по размерам гена и одновременно инициировать транскрипцию. Сигналом терминации транскрипции служит последовательность из нескольких следующих друг за другом тимидиловых нуклеотидов. Роль спейсера в транскрипции, по крайней мере в опытах in vitro, пока не была обнаружена. Новообразованная 5S РНК, по-видимому, не подвергается модификации и процессингу. [20]
Особенность участков генов 5S РНК и тРНК, узнаваемых фак-1 торами транскрипции и РНК-полимеразой и обеспечивающих ини-1 диацию транскрипции, состоит в том, что они локализованы непо-1 средственно в транскрибируемом районе ( или районах) гена. Размеры транскрипционного комплекса, включающего субъединицы полимеразы, достаточно велики, чтобы взаимодействовать с внутренними районами небольшого по размерам гена и одновременно инициировать транскрипцию. Сигналом терминации транскрипции служит последовательность из нескольких следующих друг за другом тимидиловых нуклеотидов. Роль спейсера в транскрипции, по крайней мере в опытах in vitro, пока не была обнаружена. Новообразованная 5S РНК, по-видимому, не подвергается модификации и процессингу. [21]
Особенность участков генов 5S РНК и тРНК, узнаваемых фак-1 торами транскрипции и РНК-полимеразой и обеспечивающих инин циацию транскрипции, состоит в том, что они локализованы непо-1 средственно в транскрибируемом районе ( или районах) гена. Размеры транскрипционного комплекса, включающего субъедини-ды полимеразы, достаточно велики, чтобы взаимодействовать с внутренними районами небольшого по размерам гена и одновременно инициировать транскрипцию. Сигналом терминации транскрипции служит последовательность из нескольких следующих друг за другом тимидиловых нуклеотидов. Роль спейсера в транскрипции, по крайней мере в опытах in vitro, пока не была обнаружена. Новообразованная 5S РНК, по-видимому, не подвергается модификации и процессингу. [22]
Были получены растения, устойчивые к гли-фосфату - гербициду, быстро разлагающемуся в почве на нетоксичные составляющие и потому безопасному для окружающей среды. Глифос-фат является ингибитором 5-енолпирувилши-кимат - 3-фосфатсинтазы ( EPSPS) - фермента, играющего важную роль в синтезе ароматических аминокислот и у бактерий, и у растений. EPSPS, помещен под контроль растительного промотора и сигналов терминации транскрипции / полиаденилирова-ния и введен в растительные клетки. Трансгенные растения табака, петуньи, томата, картофеля и хлопка, синтезировавшие EPSPS в количестве, достаточном для замены ингибиро-ванного гербицидом растительного фермента, были устойчивы к глифосфату и при обработке, в отличие от сорняков, не погибали. [23]
Один из них основывается на присоединении к клонированному гену - без нарушения рамки считывания - сегмента ДНК, кодирующего короткую аминокислотную последовательность, которая специфически связывается с каким-либо химическим элементом, соединением или макромолекулой. Такую конструкцию встраивают в экспрессирующий вектор между промотором и сайтом терминации транскрипции. Короткая аминокислотная последовательность в составе рекомбинантного белка, синтезируемого в хозяйской клетке, играет роль аффинной метки. [24]
По оценкам, ущерб, наносимый урожаю картофеля в результате поражения этой культуры патогенной почвенной бактерией Erwinia саго - tovora, составляет примерно 100 млн. долл. Положение усугубляется тем, что у растений не выявлено никаких способов защиты от данной инфекции, которые можно было бы использовать для выведения устойчивых коммерческих сортов. Чтобы обеспечить специфичность секреции, к гену лизоци-ма фага Т4 была пришита последовательность, кодирующая сигнальный пептид ос-амилазы ячменя, и ген помещен под транскрипционный контроль 358-промотора вируса мозаики цветной капусты, сигнала терминации транскрипции и сайта полиаденилирования. [26]
Ранние гены вируса осповакцины обычно расположены группами; считываемые с них транскрипты иногда перекрываются. Характерна ситуация, когда транскрипты имеют идентичные З - концы и различаются по длине 5 -концевой последовательности. Очевидно, в таких случаях используются разные промоторы. Поскольку в клетках эукариот трансляция чаще всего начинается с первого ( от 5 -конца) AUG-триплета, мРНК с разной длиной б - конца могут направлять синтез разных белков; при этом могут использоваться как одинаковые, так и неодинаковые открытые рамки считывания. Впрочем, не так уж редко ранние мРНК имеют идентичные 5 -концы, но различаются по длине 3 -концевого сегмента; в таких случаях речь, по-видимому, идет о недостаточно эффективной терминации транскрипции. [27]
Ранние гены вируса осповакцины обычно расположены группами; считываемые с них транскрипты иногда перекрываются. Характерна ситуация, когда транскрипты имеют идентичные З - концы и различаются по длине 5 -концевой последовательности. Очевидно, в таких случаях используются разные промоторы. Поскольку в клетках эукариот трансляция чаще всего начинается с первого ( от 5 -конца) AUG-триплета, мРНК с разной длиной 5 -конца могут направлять синтез разных белков; при этом могут использоваться как одинаковые, так и неодинаковые открытые рамки считывания. Впрочем, не так уж редко ранние мРНК имеют идентичные 5 -концы, но различаются по длине З - концевого сегмента; в-таких случаях речь, по-видимому, идет о недостаточно эффективной терминации транскрипции. [28]
Ранние гены вируса осповакцины обычно расположены группами; считываемые с них транскрипты иногда перекрываются. Характерна ситуация, когда транскрипты имеют идентичные З - концы и различаются по длине 5 -концевой последовательности. Очевидно, в таких случаях используются разные промоторы. Поскольку в клетках эукариот трансляция чаще всего начинается с первого ( от 5 -конца) AUG-триплета, мРНК с разной длиной 5 -конца могут направлять синтез разных белков; при этом могут использоваться как одинаковые, так и неодинаковые открытые рамки считывания. Впрочем, не так уж редко ранние мРНК имеют идентичные 5 -концы, но различаются по длине З - концевого сегмента; & таких случаях речь, по-видимому, идет о недостаточно эффективной терминации транскрипции. [29]
Внутри этих оперонов имеются р-зависимые терминаторы, на которых, однако, в норме терминации не происходит. С низкой эффективностью идет в этих оперонах терминация и на искусственно введенных р-зависимых терминаторах. Терминаторы внутри генов рнбосомной РНК, по-видимому, не нужны для его функционирования. Они просто там есть, потому что некоторые последовательности, необходимые для функционирования рРНК, проявляют терминирующие свойства. Когда такие последовательности встречаются в составе мРНК, с терминаиией борется рибосома, осуществляющая трансляцию. Поэтому в отсутствие трансляции внутри многих генов происходит терминация транскрипции. В случае рибосомных РНК, которые никогда не транслируются, для борьбы с терминацией в ненужных местах предусмотрена система антитермннации, формирующаяся в начале оперона. Какие белки принимают участие в этой системе, еще не ясно. [30]
Страницы: 1 2 3