Cтраница 4
Для проведения ЖХ-анализа с детектированием разделенных компонентов в реальном масштабе времени пригоден только метод проточной кюветы. К сожалению, наиболее популярные в ЖХ расторители сильно поглощают в средней части ИК-области спектра, потому использование данного метода связано с большими трудностями. Для успешного сочетания ЖХ-системы с ИК-спектрометром с детектированием в проточной кювете приходится решать целый ряд проблем. Прежде всего нужно выбрать подходящие компоненты неподвижной фазы. Однако в то же время, для уменьшения помех, оказываемых растворителем, длину пробега луча желательно уменьшить. При этом для компенсации потери чувствительности необходимо либо увеличить массу вводимой в колонку пробы, либо выбрать более чувствительную систему детектирования. Поскольку при увеличении пробы можно перегрузить колонку, а усовершенствовать оптическую систему детектирующего спектрометра трудно, то остается выбирать наиболее прозрачные растворители и проточную кювету с оптимальной длиной пробега луча. Эти проблемы рашаются очень непросто, и поэтому осуществить прямое сопряжение ЖХ-системы с ИК-спектрометром посредством проточной кюветы обычно достаточно сложно. [46]
Как известно, максимальная предельная нагрузка ( см. гл. A, и рис. VI.2) равна тому максимальному количеству пробы, при котором разделение на определенной колонке происходит без ухудшения ее разделительной способности. На обычных аналитических колонках ( внутренний диаметр 3 - 4 мм и длина 30 см) можно легко разделить пробу примерно в 1 мг. При аналитическом разделении ( когда величина пробы соответствует линейной области), меняя условия разделения, можно оптимизировать разделение таким образом, что расстояние между пиками станет очень большим. Само собой разумеется, что при этом длительность анализа увеличивается. Если пики удалены друг от друга достаточно далеко, то пробу можно увеличить. Хотя пики при этом станут шире, перекрывания зон веществ тем не менее не произойдет из-за лучшего разрешения. Следует только учесть, что с увеличением пробы время удерживания становится меньше. При очень больших пробах элютивная хроматография может перейти в вытеснительную хроматографию ( ср. I): пик одного компонента при определенных условиях вытесняется из колонки пиком следующего за ним второго компонента. В этом случае зоны элюируемых соединений больше не разделены зонами чистого элюента. [47]