Cтраница 3
Тушение люминесценции, как правило, носит весьма избирательный характер. Приведенные на рис. 17 данные показывают, что сила тушителя зависит от того, что он тушит. Анилин, являясь весьма активным тушителем свечения флуоресиеина, практически не тушит свечения хинин-сульфата. Гваякол, наоборот, активно тушит свечение хинин-сульфата и мало влияет на свечение флуорес-цеина. [31]
В колонку1 ( 10 - 12 мм), заполненную 15 г оксида алюминия в этаноле, заливают сразу 30 мг смеси флуоресцеина и метиленового синего ( 1: 1) в 20 мл этанола. По мере прохождения раствора через колонку наблюдается разделение синей полосы метиленового синего от зелено-желтой полосы флуоресцеина. Метиленовый синий вымывают этанолом из колонки в приемник. Затем меняют приемник и флуорес-цеин вымывают водой. Полученные растворы выпаривают, определяют выход каждого красителя. [32]
Особой областью флуоресцентного анализа является изучение ферментативной активности в жидких средах, тканях и клетках. Для большинства известных в настоящее время ферментов разработаны чувствительные флуоресцентные методы анализа, основанные на собственной флуоресценции самих ферментов или продуктов их метаболизма. В то же время в последние годы разработаны очень чувствительные методы определения активности ферментов с помощью флуоресцирующих метчиков. В растворе флуорогенные соединения не флуоресцируют, а при наличии в исследуемой среде активного специфического фермента субстрат подвергается разрушению, флуорохром высвобождается и возникает интенсивная флуоресценция. Для анализа активности клеточных эстераз был предложен диацетат флуорес-цеина, который легко проникает в живые клетки и, расщепляясь с освобождением флуоресцеина, придает клеткам с активными эсте-разами зеленую флуоресценцию. [33]
Смесь тщательно перемешивают, помещают в колонки на 2 / з высоты, уплотняют и вносят исследуемый раствор. При этом наблюдается образование синей зоны. IrbSCv Затем вводят 2 - 3 капли проявителя - насыщенного спиртового раствора флуоресцеина. Вверху образуется синяя зона 12, после чего через хроматограмму пропускают 5 - 6 капель раствора флуоресцеина. Ниже синей зоны образуется красно-оранжевая зона соединения брома с флуорес-цеином. [34]
Феноловый красный реагирует с бромом в щелочной среде, требуется жесткий контроль за условиями проведения реакции. Подчинения закону Бугера - Ламберта - Бера не наблюдается. Крезоловый красный ( о-крезолсульфонафтолеин), аналог фенолового красного, по мнению авторов этой работы, является более чувствительным реагентом по сравнению с феноловым красным. Другим применяемым реагентом является флуорес-цеин, который при взаимодействии с бромом окисляется до эозина. [35]
Кроме того, чувствительность к свету дает идеальную возможность практически пространственно-однородного возбуждения объема извне. Если освещаемый объем имеет достаточно малую толщину, то разумно считать, что интенсивность света внутри - его постоянна. С другой стороны, интенсивность света является мультипликативным параметром в законе поглощения Ламберта - Бэра, поэтому следует ожидать, что флуктуации будут оказывать сильное влияние на систему. Экспериментальное подтверждение этому уже было получено в случае реакции Вригг -: а - Раушера. Однако эта реакция весьма сложна и механизм ее в деталях не известен. Экспериментальная система, рассмотренная в разд. Это процесс термолюминесценции красителя флуорес-цеина в стекле борной кислоты, представляющий собой один из примеров двухфотонных процессов. Они важны в фотобиологии, Б частности, они лежат в основе биосинтеза. Данная система также имеет то преимущество, что ее неравновесными свойствами можно полностью управлять, изменяя поток энергии падающего света. Другими словами, это замкнутая система, которая не обменивается веществом с окружением. В последующих разделах мы изучим класс фототепловых систем, в которых при детерминированных условиях может возникать бистабиль-ность благодаря совместным эффектам поглощения света в химической реакции и переноса тепла. Эта бистабильность может меть место в самой простой химической системе, которую только можно вообразить, а именно в молекулярной реакции изомеризации. [36]