Флуорохром

Cтраница 1

Флуорохромы, как, например, акридин, теазол, ксептан, хино-лпн и их производные и естественные красящие пигменты: хлорофилл, порфирин, хинин, берберин и др., обладают замечательным свойством избирательной адсорбции. Препарат обрабатывается, в отличие от обычных методов прокрашивания, сильно разбавленными растворами флуорохромов, так что на глаз никаких изменений в препарате почти не наблюдается. Между тем один и тот же флуорохром, адсорбируясь на отдельных деталях препарата, связывается с ним по-разному, что обнаруживается в изменении цвета свечения флуорохрома. В результате получается контрастная, цветная люмппссцпрующая картина. В других случаях, чтобы получить многоцветную картину, один и тот же препарат флуорохромируется в различного состава растворах последовательно или сразу в их смеси. Возможна и дальнейшая обработка препарата в целях усиления или ослабления свечения тех или иных деталей препарата. Метод флуорохромирования очень успешно применяется, в частности, в микробиологии. Он имеет преимущество перед методом обычного окрашивания препаратов, изучаемых в белом свете, так как позволяет вести наблюдение живых микрообъектов, а не только фиксированных. [1]

Флуорохром, используемый для метки антител, должен иметь функциональные группы, обеспечивающие его прочное присоединение к белку антитела. Флуорохром должен обладать также высоким квантовым выходом флуоресценции. При соединении с белком антитела флуорохром не должен существенно изменять ни физико-химических, ни серологических свойств антитела и должен флуоресцировать в области длин волн, отличных от собственной флуоресценции белковых хромофоров. [2]

Флуорохром Л 2 - порошок зеленого цвета, растворяющийся в воде с образованием коллоидного раствора, содержащего липотропные и гидротрошше вещества; при его применении получается нередко многокрасочная картина ( в люминесцентном микроскопе), так как одновременно окрашиваются как липотропные, так и гидротропные ткани в разные контрастные тона. [3]

Флуорохромы ( люмогены) используют отнюдь не только в люминесцентной микроскопии: их с успехом применяют и во многих других случаях, например для получения флуоресцентных адсорбентов при хро-матографировании бесцветных и нелюминесцирующих соединений. Зоны вещества на хроматограмме обнаруживают по отсутствию люминесценции адсорбента в тех местах, где вследствие абсорбции веществом возбуждающего излучения адсорбент не люминесцирует. Брокман и Байер [ 311 рекомендуют морин для покраски адсорбента, но только если хромато-графируют на окиси алюминия, на окиси магния или на карбонате кальция; если адсорбент - кремнезем, пользуются берберипом; применение натриевой соли 3-оксипирен - 5 8 10-трисульфокислоты для покраски подкисленной соляной кислотой окиси алюминия ( 80 мг на 1 кг) позволяет выявлять вещества, спектр поглощения которых простирается в область коротких длин волн. [4]

Флуорохромы связываются с компонентами микроскопических препаратов по-разному: электростатически - связями типа солеобразных и более слабо - силами типа ван-дер-ваальсовых. Этим объясняется то, что, в зависимости от особенностей физико-химической природы, отдельные структуры и компоненты на срезах из тканей могут люминесцировать по-разному, хотя соответствующие препараты изготовлены с использованием одного и того же флуорохрома. [5]

Флуорохромы подбираются при этом так, чтобы каждый из них контрастировал определенную деталь в препарате. Не меньшее значение имеет прием, позволяющий более или менее избирательно тушить или изменять цвет или интенсивность люминесценции отдельных компонентов объекта; благодаря этому остальные компоненты, продолжающие ярко люминесцировать, могут быть выявлены особенно четко. [6]

Схема расположения источника света И, светофильтра С. [7]

Преимущество флуорохромов перед обычными красителями состоит еще и в том, что они нужны в очень малых концентрациях и их влияние на исследуемый объект обычно незначительно. [8]

Оба флуорохрома могут быть использованы при изучении проницаемости кожи; на участок кожи ( 1 см2) наносился флуо-рохром, по истечении некоторого периода времени ( от долей минуты до месяцев) кусочки кожи вырезались и гистологически исследовались при помощи люминесцентного микроскопа. [9]

Оба флуорохрома дают возможность избирательно окрашивать жиры и липоиды в разные тона в зависимости от их состава. [10]

Кроме указанных флуорохромов применялись также эозин, флуорес-цеин, метилеиовый голубой, родулип, корифосфин, примулин, сафранин, антрацен, диметилпафтейродин, ыетилумбеллиферон и др. Наиболее чет-i oe различие в свечении жизнеспособных и нежизнеспособных семян пте-штцы, ржи и ячменя дает диметилнафтейроднн. [11]

Были испытаны флуорохромы акридин оранжевый, при-мулин, аурамин на культурах E. В результате разработан быстрый ( 13 с) флуорометрический метод автоматического учета числа бактерий в мазке. Чувствительность метода, по мнению авторов, вполне достаточна для регистрации специфического свечения бактерий, окрашенных люминесцирующи-ми красителями. [12]

Почти все флуорохромы вызывают яркое свечение клеточных стенок, в особенности в одсревянелых и опробковевших тканях. [13]

Во-вторых, флуорохром должен иметь достаточно специфический и не размытый спектр. Это позволяет выделить его люминесценцию даже на фоне интенсивной собственной флуоресценции всего объекта. В случае же если спектр метчика недостаточно характерен и к тому же перекрывается спектром собственной флуоресценции объекта, это накладывает очень большие огра. [14]

На поверхности флуорохрома фильтр свободно плавает в течение 15 - 20 мин. Дальнейшее отмывание фильтра, высушивание, приготовление препарата производят так же, как при окраске акридиновым оранжевым. [15]

Страницы: 1 2 3 4