Cтраница 3
Для люминесцентной метки белков применяют флуорохромы: изо-цианат и изотиоцианат флуоресцеина, некоторые производные родамина, в том числе изоцианат тетраметилродамина, хлорид диметил-нафтил-ами-но - сулъфокислоты и ядерный красный прочный. Наиболее широко используется изоцианат флуоресцеина. Его растворяют в смеси диоксана с ацетоном и в таком виде соединяют с белком ( обычно глобулиновой фракцией в количестве 5 мг флуорохрома на 100 мг белка) при температуре 0 - 5 С, перемешивая в течение 18 часов. Полученный коньюгат белка с флуоресце-ином освобождают от несвязавшегося красителя сначала с помощью диализа против забуференного при рН9 0 физиологического раствора. Дальнейшая очистка от избыточного красителя производится переосаждением белка сульфатом аммония ( 4 - 5 раз), пока надосадочная жидкость не перестает люминесцировать. Препараты ( мазки, суспензии, замороженные срезы), как фиксированные ацетоном, так и нефиксированные, приводят в соприкосновение с люминесцентно-меченым белком в течение 30 минут, промывают в физиологическом растворе ( рН7 - - 7 5) и заключают в забу-ференный глицерин. [31]
Помимо этих и почти все другие флуорохромы сообщают мышцам более или менее ярко выраженную флоуресценцито. [32]
Отмечается, что при использовании флуорохромов удобно возбуждать флуоресценцию синим светом со скрещенными светофильтрами. Обсуждаются перспективы использования ультрафиолетовой люминесценции. [33]
При флуорохромироваиии жиров и липоидов различными флуорохромами также могут быть выявлены их особенности по специфическому характеру люминесценции. Перспективным здесь следует считать комбинированное использование различных жирорастворителей с флуорохромами. Особый интерес представляют возможности, открываемые при прижизненном флуорохромировании. [34]
В приложении приведены выпускаемые у нас флуорохромы. [35]
Коллагеновые и эластичные волокна с большинством флуорохромов сохраняют собственную флуоресценцию или флуоресцируют цветом, промежуточным между цветами их собственной флуоресценции и флуоресценции флуорохрома. [36]
Для гигиенических целей особенно важно было подобрать флуорохром, подходящий для раздельного определения живых и мертвых клеток в хлорированной питьевой воде. [37]
Для гигиенических целей особенно важно было подобрать флуорохром, подходящий для раздельного определения живых и мертвых клеток в хлорированной питьевой воде. При испытании на чистых культурах, обработанных хлором, примулин оказался неперспективным, однако при исследовании водопроводной воды в отдельных опытах получены обнадеживающие результаты. Так, в одной из проб водопроводной воды было установлено свечение 70 - 75 % клеток, подсчитанных по методу Разумова, что теоретически может соответствовать истинному числу мертвых клеток. [38]
Многие исследователи обращают особое внимание на выцветание флуорохрома под действием возбуждающего излучения в момент измерения. По мнению Пренны и его сотрудников [32] такое явление всегда имеет место и развивается в течение первых секунд после начала исследования. Пренна проводит измерения в первую секунду после начала облучения препарата с помощью осциллоскопической техники. [39]
Кратко описаны результаты, полученные при использовании флуорохромов для выявления клеточных структур, для исследования изменений клеток под действием наркотиков и изучения реакции живых клеток на внешние воздействия; для распознавания сходно флуоресцирующих микроорганизмов использованы тушители люминесценции. [40]
Описана вторичная флуоресценция многочисленных препаратов, окрашенных флуорохромами: автор подчеркивает, что у этих препаратов видны микроскопические детали структуры и поэтому наблюдения вторичной флуоресценции имеют большие преимущества перед наблюдениями первичной флуоресценции: недостаток метода - нестойкость флуорохромн-рованных препаратов. [41]
Из продуктов пиролиза керосина автор получил два новых флуорохрома ( JNs 1 и № 2), которые могут быть использованы как для окраски гистологических срезов, так и для прижизненной окраски животных. Флуорохром № 1 - маслянистое вещество густой консистенции, растворяется в органических растворителях и в маслах, применяется в спиртовом ( 95) растворе для окраски гистологических срезов животной ткани, в бензольном и масляном растворах для прижизненной окраски кожи. [42]
Реактивы и оборудование: 1) исходный раствор флуорохрома 1: 1000 на дистиллированной воде, 2) 0 2 М фосфатно-цитратная или 0 2 М ацетат-но-иатриевая буферная смесь рН 3 6 - 4 0, 3) 96, 75, 50, 25 % - ный этанол, 4) этанол абсолютный, 5) О-ксилол, 6) полистирол, 7) предметные и покровные стекла, предварительно проверенные на отсутствие собственной люминесценции, 8) микроскоп МЛ-2, 9) секундомер, 10) фиксаторы Карнуа и Бек-кера. [43]
Иногда препараты пропитывают не одним, а несколькими разными флуорохромами, в результате чего под микроскопом они оказываются живописно окрашенными. [44]
Акридиноранж, приготовленный на растворе двууглекислой соды в качестве флуорохрома, выявляет совершенно отчетливо нервные клетки с отростками, их взаимосвязи, тончайшие нервные волоконца, сосуды мозга и их рецепторы. [45]